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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 核酸提取后酶切电泳成像多一条带？
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图图怪

新虫 (小有名气)

[求助] 核酸提取后酶切电泳成像多一条带？ 已有2人参与

基因1557经离心等提质粒后，加TEbuffer溶解，加入buffer和Bam I、HindIII酶切后电泳呈三条带（应该只有两条的）求问原因和解决办法，谢谢各位
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1楼 2016-04-18 10:29:07
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天机哥哥

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
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2楼2016-04-18 12:18:31
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守望海贝

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
酶切不完全，改善方法：可以适当延长酶切时间、增加酶量，另外看酶有没有过期
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3楼2016-04-18 16:48:45
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图图怪

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 天机哥哥 at 2016-04-18 12:18:31
多出一条带，可能是没有酶切过的完整质粒，也有可能是只切开了一个酶切位点的线性质粒，其主要原因在于酶切不完全，建议酶切时间适当延长！！！

谢谢，我还想问一下，我同学用酶hindIII,一样的时间和条件，他切出来是对的，两条带，我的情况是因为bamHI酶要求酶切时间比较长么？我用空质粒跑电泳出现很多条带，但是两种酶切好几次跑出来都是三条带==

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4楼2016-04-20 22:53:29
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天机哥哥

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
5楼2016-04-21 12:06:11
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图图怪

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 天机哥哥 at 2016-04-21 12:06:11
首先，酶切时BamHI和HindIII不能同时进行双酶切，否则容易出现星号活性，您如果要用这两个酶切位点，建议您选择BamHI-HF和HindIII-HF，这两个酶可以同时双酶切，而且价格和普通的BamHI和HindIII一样，并且降低了星 ...

你知道凝胶成像仪怎么用嘛？我同一块琼脂块，有时能看见条带，有时又找不到了

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6楼2016-04-21 20:24:12
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