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幻缕

新虫 (初入文坛)

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[交流] 去磷酸化已有5人参与

如果要让酶切后的载体和片段连起来，则片段要去磷酸化，为什么质粒不用去磷酸化呢？还有，去磷酸化之后的片段和载体怎么连成完整的环状？而不是只能连一端？

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1楼 2016-04-17 23:22:40

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原海亮

木虫 (著名写手)

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专业: 微生物生理与生物化学

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

为什么我们是相反的，片段一般不需要磷酸化，因为片段本身自连，即使能转化进去，也是不会生长的，因为它没有携带复制元件，抗性筛选等基因。而载体进行去磷酸化，可以显著降低假阳性的出现，要知道质粒载体自连是可以在感受态里自助复制，并影响你后续筛选克隆的。对于去磷酸化后连接是否完整，这个你可以去看看去磷酸化的原理，理论上好像是会有一个缺口，进入宿主后会被填补。

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