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向阳坊

铜虫 (正式写手)

[交流] 请问我的电泳出什么问题了?

请各位高手,帮忙看看这张图D4,不知道问题出在哪?
我做的是昆虫全蛋白,采用TCA-丙酮提取法,采用bio-rad的IEF电泳仪和IPG胶条,电泳条件是 水化 50V 12h
S1 250V 线性 30min
S2 1000V 线性 3h
S3 4000V 快速 1h
S4 9000V 线性 3h
S5 9000V 快速 60000Vhrs

SDS-PAGE是10mA,30min,然后25mA
考马斯亮兰染色。
原来提取方法一样,也是一样的跑,可是点清晰而且点多啊


每次电压都能上到设定值9000V,而且电流聚集时基本在25mA以下
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shenye.judy

木虫 (正式写手)

★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-4 11:14
像是等电聚焦上的样品有问题。
从蛋白提取之后,到上样之前也和原来一样吗?觉得样品中的蛋白降低了。
是不是蛋白保存出了问题?
2楼2008-10-25 14:23:50
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向阳坊

铜虫 (正式写手)

蛋白是新提的,然后定量,上样量与原来是一样,然后分装,保存于-80度冰箱中。
3楼2008-10-25 16:39:26
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向阳坊

铜虫 (正式写手)

请帮忙看看啊!
4楼2008-10-26 20:07:54
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向阳坊

铜虫 (正式写手)

继续求助!
5楼2008-10-27 19:29:05
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向阳坊

铜虫 (正式写手)

6楼2008-10-28 22:19:44
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