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season131124

铁虫 (小有名气)

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[求助] 两批同样的多糖，第一批灌胃小鼠一切正常，第二批导致小鼠死亡，不知道原因何在？？

求助：
本人提取了2批多糖，第一批灌胃小鼠一切正常，第二批确导致小鼠死亡。多糖来源、灌胃剂量均一样。

第二批采用100mg/ml和200mg/ml多糖灌胃babl/c小鼠，高剂量灌胃1天后出现小鼠死亡，2天后高剂量死亡4只，低剂量死亡1只，正常组没有死亡。期间观察小鼠状态，高剂量组小鼠状态低迷、毛发变稀疏，眼睛呈半闭状态。解剖死亡小鼠，发现其肝脏病变，有脂肪粒状，且肝脏颜色不均一（图1/2），其中一只肝脏周围有黄色乳糜状物质（见高剂量2图）。解剖未死亡的高剂量组小鼠，肝脏是正常状态。现在已排除是灌胃手法问题，基本上确定是多糖样品的问题。
灌胃的多糖是用生理盐水配制的。

我的多糖制备流程如下：
原料经过80%乙醇脱色、脱小分子物质后，采用热水浸提，将浸提液浓缩后采用Sevag法脱蛋白，其中Sevag试剂为氯仿：正丁醇=4:1（V/V），将多糖和sevag试剂按照4：1（V/V）混合后，磁力搅拌0.5-1h后离心，去掉有机试剂层和蛋白层，脱蛋白次数为25-30次，直至基本无蛋白。收集上清多糖溶液，将残留的有机试剂采用旋转蒸发的方式去除。再将多糖透析3d，浓缩后乙醇沉淀，将沉淀用乙醇清洗几次后，冷冻干燥得到多糖粉末。

苯酚硫酸法测多糖含量为48%左右，结合蛋白含量为8%左右。

这一批样品与前一次唯一的差别是：脱蛋白的次数增加了10次，脱蛋白时磁力搅拌的时间延长了0.5h左右。
两次多糖提取的不是同一个人，饲养、灌胃多糖的是同一个人操作。

求助各位帮忙分析一下老鼠死亡的原因：
是否是多糖的问题？还是有其他原因？如果是多糖的问题，难道是因为sevag试剂残留导致多糖毒性使小鼠立即死亡？还是存在其他的原因导致多糖变性而又毒性？

高剂量1