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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 双酶切体系一般怎么优化呢
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草溪河

铁虫 (著名写手)
现在有快切酶，挺方便快捷的

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11楼2016-04-14 16:10:51
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jingyu90217

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 草溪河 at 2016-04-14 16:10:51
现在有快切酶，挺方便快捷的

有买了takara的quickCut。但是刚开始做。前面摸的体系不对 没切开。然后实验室的童鞋都用的普通酶。还能给些建议。我就改用普通酶了………

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12楼2016-04-14 20:00:51
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jingyu90217

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by yangdl1023 at 2016-04-14 11:31:55
good luck...

昨天过夜切的结果。算切开了吗？能不能回收完连片段了呢？
双酶切体系一般怎么优化呢



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13楼2016-04-14 20:02:03
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jingyu90217

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 781055707 at 2016-04-14 14:55:00
我一般都是１ＵＬ酶切１ＵＧ质粒的。酶切位点也选那些便宜的酶，这样用起来方便也不费钱．

我第一次在50微体系里切了5微克。按酶的单位估算各加1微总共可以切25微克啊………但最后还是酶切不彻底。好多自连的。所以才好纠结到底怎么设置这个体系。选择酶量。

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14楼2016-04-14 20:04:50
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卢家彬

木虫 (小有名气)
热敏磷酸酶处理一下载体

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15楼2016-04-14 22:31:24
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jingyu90217

新虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 卢家彬 at 2016-04-14 22:31:24
热敏磷酸酶处理一下载体

具体怎么啊？

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16楼2016-04-14 22:49:01
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linglingys

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们这边也用TAKARA快切酶，一般载体不同温度酶切的话，比如（30或者37度），我们一般先30度切1.5小时，再加另一种酶37度切1.5小时。一般50ul体系切2ug,酶各用2ul
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17楼2016-04-15 08:50:21
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jingyu90217

新虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by linglingys at 2016-04-15 08:50:21
我们这边也用TAKARA快切酶，一般载体不同温度酶切的话，比如（30或者37度），我们一般先30度切1.5小时，再加另一种酶37度切1.5小时。一般50ul体系切2ug,酶各用2ul

快切酶的效果怎么样啊？要是双酶切的话就3h吗？

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18楼2016-04-15 19:21:47
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骆明亮

新虫 (小有名气)
如果一次酶切不彻底可以进行二次酶切，我之前做时，是大冬天，后来这么做的，有些效果

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19楼2016-04-17 04:33:55
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梦想天行

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
14楼: Originally posted by jingyu90217 at 2016-04-14 20:04:50
我第一次在50微体系里切了5微克。按酶的单位估算各加1微总共可以切25微克啊………但最后还是酶切不彻底。好多自连的。所以才好纠结到底怎么设置这个体系。选择酶量。
...

加大酶量，各5ul酶,buffer要能共切才行。最好带一个另外的单切酶作为对照。

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20楼2016-04-17 08:37:41
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