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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌液PCR只有阴性对照有条带
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小鹿3姐

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌液PCR只有阴性对照有条带 已有1人参与

做TA克隆目的条带1006bp，结果只有阴性对照有条带，阴性对照就是没加菌液只加了水为模版的。如下图，挨着marker最亮的就是对照。第八个有点亮，这样还能测序吗？

菌液PCR只有阴性对照有条带
Administrator 2016-04-12 11hr 24min.jpg
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1楼 2016-04-12 14:22:29
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任我逍遥江南

铜虫 (正式写手)
阴性对照都跑出来了，，，你没分析一下你的实验操作有什么失误么

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2楼2016-04-12 14:35:21
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小鹿3姐

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 任我逍遥江南 at 2016-04-12 14:35:21
阴性对照都跑出来了，，，你没分析一下你的实验操作有什么失误么

我经常做TA克隆，这种现象之前也出现过，并没有觉得操作和正常做出来的时候有什么不同啊
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3楼2016-04-12 14:53:42
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任我逍遥江南

铜虫 (正式写手)
阴性对照跑出条带，说明有污染。但是看你的阴性对照的条带和样本似乎是一样的

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4楼2016-04-12 15:02:20
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2016-04-12 18:58:55
小鹿3姐: 金币+5, ★有帮助 2016-04-13 11:26:44
你的水样有污染，还有你的移液器也得拆开擦一擦。实验组都没有带怎么测序？测出来也不敢用呀。
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5楼2016-04-12 16:15:12
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小鹿3姐

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-04-12 16:15:12
你的水样有污染，还有你的移液器也得拆开擦一擦。实验组都没有带怎么测序？测出来也不敢用呀。

如果说水样或者移液枪污染，那别的组都用的一个水样和移液枪，怎么只有对照有呢，不应该是都被污染了么
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6楼2016-04-12 16:32:39
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卡维斯

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 小鹿3姐 at 2016-04-12 16:32:39
如果说水样或者移液枪污染，那别的组都用的一个水样和移液枪，怎么只有对照有呢，不应该是都被污染了么...

也对，但这阴性对照都出带，并且比实验组都亮，结果不可行啊。
建议你处理下，然后菌落PCR时候稍稍多一点菌，注意不要太多。
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7楼2016-04-12 16:38:22
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小鹿3姐

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-04-12 16:38:22
也对，但这阴性对照都出带，并且比实验组都亮，结果不可行啊。
建议你处理下，然后菌落PCR时候稍稍多一点菌，注意不要太多。...

ok,谢谢
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8楼2016-04-12 17:25:31
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科大小飞

铁虫 (初入文坛)
这种情况要考虑纯水和引物有污染

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天道酬勤
9楼2016-04-13 17:52:01
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chu.159660

新虫 (初入文坛)
我的实验也是这种情况，可能整个实验室都被你经常做的模板污染了。
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10楼2016-05-23 08:54:38
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