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YangLryyc

铜虫 (小有名气)

[交流] 请教半定量RT-PCR结果很不稳定

请教各位:
我用RNA反转录后的产物cDNA去做PCR以确定一个基因在control组和knock down组中的表达情况,发现用不同的引物(针对这个基因不同部位设计的)去PCR,得出的结论不同,不知是何原因?郁闷中~
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YangLryyc

铜虫 (小有名气)

我有两条引物,分别得到250bp和400bp的目的片段,PCR 结果很干净没有其他杂带,条带大小也差不多在预计的位置,但就是结论不一致。
3楼2008-10-24 16:44:15
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wfmgood

银虫 (小有名气)

我也正在做半定量RT-PCR,也十分关心这个问题。对于你设计不同的引物来扩目的基因得到的大小不同,不知它们之间差别有多大?
2楼2008-10-24 13:48:52
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YangLryyc

铜虫 (小有名气)

其实同一条引物PCR结果也不稳定啦,晕菜
4楼2008-10-24 22:56:01
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紫贝

不太清楚楼主说的结论不同是指什么,如果指的是基因表达量不同的话,那建议用更准确的定量方法,PT-PCR更多地只是一个作为某一段基因的定性检测。
5楼2008-10-30 09:30:30
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