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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教半定量RT-PCR结果很不稳定
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YangLryyc

铜虫 (小有名气)

[交流] 请教半定量RT-PCR结果很不稳定

请教各位：
我用RNA反转录后的产物cDNA去做PCR以确定一个基因在control组和knock down组中的表达情况，发现用不同的引物（针对这个基因不同部位设计的）去PCR，得出的结论不同，不知是何原因？郁闷中～
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1楼 2008-10-24 01:45:32
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wfmgood

银虫 (小有名气)
我也正在做半定量RT-PCR，也十分关心这个问题。对于你设计不同的引物来扩目的基因得到的大小不同，不知它们之间差别有多大？
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2楼2008-10-24 13:48:52
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YangLryyc

铜虫 (小有名气)
我有两条引物，分别得到250bp和400bp的目的片段，PCR 结果很干净没有其他杂带，条带大小也差不多在预计的位置，但就是结论不一致。
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3楼2008-10-24 16:44:15
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YangLryyc

铜虫 (小有名气)
其实同一条引物PCR结果也不稳定啦，晕菜
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4楼2008-10-24 22:56:01
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紫贝

不太清楚楼主说的结论不同是指什么，如果指的是基因表达量不同的话，那建议用更准确的定量方法，PT-PCR更多地只是一个作为某一段基因的定性检测。
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5楼2008-10-30 09:30:30
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