24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 1264  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

[求助] 重组质粒求助已有3人参与

我的目的片段是500左右,用的是pET-32a和pGEX-4T-1两种质粒。分别用双酶切切开后(存放在-20冰箱),酶切位点是EcoR1和BamH1,用T4连接酶过夜连接,可是要不就是不长菌落,要不就是假阳性克隆。     
是没切开?
还是没连上?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

娟恋幸福

新虫 (小有名气)

我最近也是这种情况,楼主得到结果了吗?求助

发自小木虫Android客户端
12楼2016-04-15 07:26:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
切没切开不是得跑电泳看看么?然后回收符合要求的条带(切下胶块或者回收产物放-20)再连接呀。
2楼2016-04-11 08:36:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hlxxym

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
请问你在酶切后是否有做切胶回收?如果没有的话,可能是发生了自连。
3楼2016-04-11 12:45:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小研来报到

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
酶切位点EcoR1和BamH1离得太近了
4楼2016-04-11 15:22:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见