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crisergioni

新虫 (初入文坛)

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[求助] 求各位帮忙看看家兔α颗粒膜蛋白（GMP-140）含量测定的96孔板数据分析

由于实验做得比较久了，步骤原先没有记全，不清楚这些吸光度到底代表的是什么，希望大神能解答一下。当时做实验也比较水。。就是跟着步骤做了一次，对ELISA也不是特别了解，望大家能详细点解释~比如加一个样品是竖着加还是横着加，哪几个孔是代表同一样品的不同稀释浓度。真心都不懂。。
一下是96孔板的吸光度数据：
      1             2             3                4             5             6             7             8            9             10    11             12
A 1．345 0.034 0.031 0.032 2.76 2.597 2.248 0.998 0.706 0.315 0.034 0.034
B 1.327 0.035 0.032 0.033 2.141 2.607 2.251 1.174 0.705 0.317 0.034 0.044
C 1.365 0.032 0.033 0.032 2.672 2.572 1.385 0.729 0.315 0.313 0.034 0.035
D 1.333 0.465 0.56 0.199 0.54          0.321    0.469 0.368 0.7          0.536       0.442    0.042
E 1.355 0.037 0.033 0.033 0.033 0.033 0.033 0.035 0.033 0.034 0.034 0.035
F 1.352 0.042 0.039 0.04          0.039 0.043 0.038 0.037 0.038 0.04 0.04    0.041
G 1.347 0.04    0.036 0.035 0.035 0.044 0.033 0.032 0.033 0.034 0.033 0.036
H 1.306 0.044 0.04    0.039 0.037 0.035 0.034 0.032 0.034 0.034 0.035 0.037

一下是加样步骤，其余的温育等省略了，步骤就只有这么点。。
1. 标准品的稀释
80 ng/ml 5号标准品 120 μL的原倍标准品加入120 μL标准品稀释液
40 ng/ml 4号标准品 120 μL的5号标准品加入120 μL标准品稀释液
20 ng/ml 3号标准品 120 μL的4号标准品加入120 μL标准品稀释液
10 ng/ml 2号标准品 120 μL的3号标准品加入120 μL标准品稀释液
5 ng/ml 1号标准品 120 μL的2号标准品加入120 μL标准品稀释液
2. 将原血浆作为样品1，浸润过止血材料的血浆为样品2
3. 加样：
（1）空白孔：只加显色剂A、B和终止液，其余相同。
（2）标准品孔：加入标准品50 ul,链霉素亲和素-HRP 50 ul。
（3）样品孔：加入样品40 ul，然后各加入抗GMP-140 抗体10 ul，链霉亲和素-HRP 40 ul，盖上封板膜，轻轻震荡混匀，37 ℃温育1 h。

这是得出的标准曲线

捕获.PNG