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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 网络生活区 » 有奖问答 » 学术帮助 » 怎么用ABI 2720设置TAIL-PCR程序
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WhoKong

金虫 (小有名气)

[求助] 怎么用ABI 2720设置TAIL-PCR程序

请问有人做过TAIL-PCR吗？需要您的帮助，我有一台ABI 2720的PCR仪！不晓得怎么设置！还是根本不行？
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1楼 2016-04-08 19:23:57
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yufeiwaner

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
WhoKong: 金币+3, ★有帮助 2016-05-10 07:35:54
虫友你的实验怎么样了？我刚开始做TAIL PCR。看文献的样子，我也还有点迷糊。仪器设置应该很简单，循环结束再进行另一个循环就行。希望分享一下经验。
http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1046/j.1365-313X.1995.08030457.x/full#opennewwindow
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2楼2016-04-28 00:30:23
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WhoKong

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yufeiwaner at 2016-04-28 00:30:23
虫友你的实验怎么样了？我刚开始做TAIL PCR。看文献的样子，我也还有点迷糊。仪器设置应该很简单，循环结束再进行另一个循环就行。希望分享一下经验。
http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1046/j.1365-313X.19 ...

我已经会了，在一个循环插入多个温度就可以了。比如说
15个循环有9个温度：
94度30秒，68度30秒，72度2分钟。
94度30秒，68度30秒，72度2分钟。
94度30秒，44度30秒，72度2分钟。

显示屏上应该就是9Tmp,15Cycle。
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3楼2016-04-28 08:35:15
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yufeiwaner

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by WhoKong at 2016-04-28 08:35:15
我已经会了，在一个循环插入多个温度就可以了。比如说
15个循环有9个温度：
94度30秒，68度30秒，72度2分钟。
94度30秒，68度30秒，72度2分钟。
94度30秒，44度30秒，72度2分钟。

显示屏上应该就是9Tmp,15C ...

嗯嗯，你用的是什么酶？不过仅仅这一步就是45个小循环，我听说高保真酶进行30个普通循环就够了，太多的话容易错配。你的产物出来没？测序结果如何？
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4楼2016-04-28 17:26:31
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WhoKong

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yufeiwaner at 2016-04-28 17:26:31
嗯嗯，你用的是什么酶？不过仅仅这一步就是45个小循环，我听说高保真酶进行30个普通循环就够了，太多的话容易错配。你的产物出来没？测序结果如何？...

LA酶，takarar 的。产物最好连在T载体上去测序。
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5楼2016-04-29 12:19:57
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yufeiwaner

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你的测序结果怎么样，克出来多少bp？我还在摸索。。。方便的话咱QQ聊，461858059
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6楼2016-05-13 13:05:50
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