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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 基因敲除 pk18无法在10%蔗糖板自杀
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yiner

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因敲除 pk18无法在10%蔗糖板自杀

我现在在做青枯菌的基因敲除，自杀质粒用的是PK18，得到一次重组子之后，双抗板划线纯化后，单菌落涂布含10%surcose单抗板时，质粒总是掉不下来，尝试过将一次重组子于蔗糖液体培养基培养3代后再进行涂布10%surcose板，质粒仍掉不下来。  我已经卡在基因敲除这一步1年多了，再敲不掉就没法毕业了，如果有知道的同学能回复，感激万分。
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fighting!!!!
1楼 2016-04-08 17:36:01
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
什么叫做质粒掉不下来

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2楼2016-04-08 21:23:35
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Ljch1121

新虫 (初入文坛)
你可以用载体上的抗生素抗性来筛选

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3楼2016-04-11 22:41:30
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Ljch1121

新虫 (初入文坛)
蔗糖自杀基因不可靠

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4楼2016-04-11 22:41:58
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dd2531742233

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Ljch1121 at 2016-04-11 22:41:58
蔗糖自杀基因不可靠

我用还可以呀，效率还行
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我的QQ719425242
5楼2016-07-15 17:35:36
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su2008su11

木虫 (正式写手)
我想问一下，在得到第一次重组子的时候，用的是T4连接酶吗？供应商是哪一家。还有连接了多久，才做的转化。感激不尽
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一命二运三风水四积阴德五读书
6楼2016-12-07 00:46:12
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chenhuale

铜虫 (小有名气)
请问第二次同源重组（双交换）只能用蔗糖压力吗？像温敏的自杀质粒，能用高温来筛二次重组吗？

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7楼2023-03-24 00:03:07
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