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lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 求救,NEB的Q5高保真酶扩增出现问题 已有2人参与

各位大神,如题:我用普通的Taq酶扩增目的片段1.6Kb左右,可以扩出,且比较亮,但是下方有些非特异带。换用NEB的Q5高保真酶,同样的条件,就啥也没有了,体系和程序用的说明书推荐的;以前看过虫友遇到过这种问题,没想到今天自己也遇到了,想问问大家的都最后如何解决的啊?交流一下吧。郁闷啊
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dkyy970111

铁杆木虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
lwk5716: 金币+3 2016-04-10 09:39:49
引用回帖:
4楼: Originally posted by lwk5716 at 2016-04-08 21:08:36
我还想问您个问题,那就是有人说可以把普通Taq酶和高保真的酶混合起来扩增,可以提高效率,也能有保真性,您知道比例吗?可以这么干吗?扩出来的是加A尾巴的吗?...

不能这么用,Q5具有外切酶活性,会切除3'突出末端,使片段平端话。

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打铁还要自身硬
8楼2016-04-10 09:07:01
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梅太奇阿拉干

木虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
lwk5716: 金币+5 2016-04-08 10:05:22
适当降低退火温度试试吧

发自小木虫Android客户端
2楼2016-04-07 23:36:23
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lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 梅太奇阿拉干 at 2016-04-07 23:36:23
适当降低退火温度试试吧

今天准备做个温度梯度试试,谢啦。
3楼2016-04-08 10:06:14
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lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 梅太奇阿拉干 at 2016-04-07 23:36:23
适当降低退火温度试试吧

我还想问您个问题,那就是有人说可以把普通Taq酶和高保真的酶混合起来扩增,可以提高效率,也能有保真性,您知道比例吗?可以这么干吗?扩出来的是加A尾巴的吗?
4楼2016-04-08 21:08:36
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