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、悠然浅笑

金虫 (初入文坛)

[交流] WB遇到的问题

实验室构建WB实验,电泳以后,切胶浸泡,甲醇活化PVDF膜,夹板黑色-海绵-滤纸-胶-膜-滤纸-海绵-夹板顺序,300mA转膜,尝试了三次,转膜时间分别为60min,100min,120min,但是转膜结束后,均为marker转到膜上,蛋白条带未转到膜上,这个怎么破????
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漫漫长路,曾孤身独自走远方,幸得到她跟我流浪
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、悠然浅笑

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by Liumengya at 2016-04-07 22:36:49
你是怎么检测蛋白没到膜上呢?

转膜过后的胶考马斯亮蓝染色,蛋白条带和平时做电泳差不多;膜化学发光显色后,成像完全木有目的蛋白。。
漫漫长路,曾孤身独自走远方,幸得到她跟我流浪
10楼2016-04-08 08:37:43
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古月问你哦

铜虫 (小有名气)


、悠然浅笑(金币+1): 谢谢参与
不大清楚你是怎么在处理胶,膜,海绵的过程,但有一点要注意的是三者在处理的过程中不要有气泡,我们实验室常用的是电压100V,时间100min,还有你的的一抗的特异性,灵敏性是否纯在问题。
我就是我,是不一样的烟火
3楼2016-04-07 09:25:18
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lfkey

木虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
既然Marker能赚到膜上,说明在某种程度上转膜条件还是可以的,至于膜上没有目标蛋白,就需要你对比分析Marker与目标蛋白的大小,依次来调整和摸索电压以及转膜时间;目标蛋白量太少也可能在转膜后难以肉眼看清的,因为转膜过程会造成损失,所以要把握好电压和时间。最后,还是要注意在铺膜和胶时尽量赶走气泡。
年轻没有失败!
4楼2016-04-07 10:57:00
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star013

新虫 (知名作家)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我们能给您做,您需要么?

发自小木虫Android客户端
5楼2016-04-07 15:04:19
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