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红笺小字木虫 (小有名气)
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用pDM4基因敲入，双交换筛不到突变体
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| 宿主菌为假结核耶尔森氏菌，之前用pDM4做过两次基因敲除或敲入，双交换后筛20个左右，有4到5个为突变体。这一次同时做3个，就是在基因组上的目的基因C端融合表达荧光蛋白，单交换都很顺利得到，但是15%蔗糖平板划线后，筛的单菌落都是野生型，每个筛了50个左右。上下游同源臂500到600bp，得不到突变体的原因是什么？请有经验的虫友指点一二，谢谢。 |
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