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evil丶zero

金虫 (小有名气)

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[求助] PCR非特异性退火如何改进PCR条件？

下面的图片是我做的PCR的结果，左二为我通过胶回收得到的模板，浓度35ng/ul上样5ul。其他为PCR结果，有很多大片段杂带，我导师说这是非特异性退火得到的。现在我想把这个PCR优化一下，该怎么做啊？师兄说可以试一下两步法PCR把退火和延伸统一一起做。
PCR50ul体系酶EX taq0.5ul 模板0.5ul。
程序为94℃预变性5min
94℃变性30s
退火59.6℃~64.1℃ （引物TM为58.2℃和61.1℃） 30s
72℃延伸 3min 6s 片段3000多
最后72℃ 8min

PCR.png

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evil丶zero

金虫 (小有名气)

2楼2016-04-06 16:57:18

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