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jackie在努力

新虫 (初入文坛)

[求助] 有关大肠杆菌乳糖操纵子的问题

最近在做大肠杆菌的敲除,现在准备敲除lacZ基因,打算敲除整个lacZ,由于刚刚涉及这方面,于是想到了这样以下可能有点乱七八糟的问题:

乳糖操纵子中的基因顺序:(lacP+lacO)+(lacZ+lacY+lacA);另外操纵子上游还有调控基因lacI
我知道的:CAP结合位点和RNA聚合酶结合位点在lacP上,阻遏蛋白结合在lacO上,lacO和lacP是有重叠的

我想问的:
①lacO基因序列和lacZ序列的N端有没有重叠的部分?如果有,我敲除整个lacZ(从起始密码子到终止密码子)会不会对阻遏蛋白的结合有影响,如果没有,那么lacO和lacZ是紧挨着还是有spacer(比如隔了SD序列,其实我也不清楚lacO和SD序列是否有重叠)

②我在资料上看到lacZ 上游启动子一段序列 5' -10 TGTTGTGTGGAA,这段序列和NCBI上K12 MG1655 相符合,而NCBI上BL21(DE3)基因组上为5’ -10 TGTTGTGTGAAA,一个G变为了一个A,请问有什么影响?

③ NCBI上BL21(DE3)基因组中除了一个完整的lacZ基因外,在T7 RNA polymerase 上游还有一段450bp 的N-lacZ 基因,请问这个片段的编码会不会分解乳糖,另外这个片段的敲除会不会对T7 RNA polymerase 的表达有影响?

以上
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595420185

新虫 (初入文坛)

3楼2020-09-17 17:08:40
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静晖淡

新虫 (初入文坛)

2楼2018-11-16 00:27:04
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