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jackie在努力

新虫 (初入文坛)

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[求助] 有关大肠杆菌乳糖操纵子的问题

最近在做大肠杆菌的敲除，现在准备敲除lacZ基因，打算敲除整个lacZ,由于刚刚涉及这方面，于是想到了这样以下可能有点乱七八糟的问题：

乳糖操纵子中的基因顺序:（lacP+lacO）+（lacZ+lacY+lacA）；另外操纵子上游还有调控基因lacI
我知道的：CAP结合位点和RNA聚合酶结合位点在lacP上，阻遏蛋白结合在lacO上，lacO和lacP是有重叠的

我想问的：
①lacO基因序列和lacZ序列的N端有没有重叠的部分？如果有，我敲除整个lacZ(从起始密码子到终止密码子)会不会对阻遏蛋白的结合有影响，如果没有，那么lacO和lacZ是紧挨着还是有spacer（比如隔了SD序列，其实我也不清楚lacO和SD序列是否有重叠）

②我在资料上看到lacZ 上游启动子一段序列 5' -10 TGTTGTGTGGAA，这段序列和NCBI上K12 MG1655 相符合，而NCBI上BL21(DE3)基因组上为5’ -10 TGTTGTGTGAAA，一个G变为了一个A，请问有什么影响？

③ NCBI上BL21（DE3）基因组中除了一个完整的lacZ基因外，在T7 RNA polymerase 上游还有一段450bp 的N-lacZ 基因，请问这个片段的编码会不会分解乳糖，另外这个片段的敲除会不会对T7 RNA polymerase 的表达有影响？

以上

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