| 查看: 1324 | 回复: 4 | |||
[交流]
WB结果 请教
|
|
本人新手刚开始做，总是出现背景高，膜花花的情况 共有两个目的蛋白一个内参。 流程：1.10ul上样量，80v，120v电泳。 2.半干转膜20v，1h（操作中发现膜剪得比胶大太多，不知是否有影响），缓冲液浸透滤纸。 3.5%脱脂奶粉25度封闭3h（由于之前做的背景高选择封闭时间加长，之前一次37度2h），摇床震荡。 4.一抗4度摇床孵育过夜，浓度两个目的蛋白均为1：2000，内参1：5000（也是由于之前背景高，一抗浓度由1：1000变为1：2000，以封闭液稀释） 5.tbst洗涤10min*4次 6.二抗1：10000，室温1h（18度左右，也是由于背景高尝试的，之前37度2h） 7.tbst洗涤10min*4次 8.ecl曝光（蛋白1.蛋白2可能有曝光液太多的情况，没有吸干，不知是否有影响） 贴上结果图，希望大神们可以指导一下为什么会出现这些情况（PTEN出现条带但是很花，p53是直标一抗但也加了二抗还是没有条带，是否抗体不好，gapdh比较好看）  20160329.gadph.JPG  20160329.p53.JPG  20160329.pten.JPG |
回复此楼» 猜你喜欢
求调剂
已经有4人回复
-
一志愿 西北大学 总分282 英语一62 求调剂
已经有3人回复
-
调剂310
已经有4人回复
-
北科281学硕材料求调剂
已经有16人回复
-
一志愿上海交大生物与医药专硕324分，求调剂
已经有6人回复
-
一志愿哈工大，085400，320，求调剂
已经有4人回复
-
316求调剂
已经有9人回复
-
085600 材料与化工 329分求调剂
已经有8人回复
-
0856求调剂
已经有6人回复
-
299求调剂
已经有4人回复
engreen2016
禁虫 (正式写手)
|
本帖内容被屏蔽 |
2楼2016-08-03 09:34:35
liyushan1130
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2466.1
- 红花: 3
- 帖子: 206
- 在线: 18.9小时
- 虫号: 1446339
- 注册: 2011-10-17
- 专业: 细胞信号转导
3楼2016-08-06 23:24:13
4楼2017-06-20 18:02:12
chaosyw
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 76 (初中生)
- 金币: 5659.9
- 红花: 18
- 帖子: 717
- 在线: 23.5小时
- 虫号: 2950501
- 注册: 2014-01-28
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
5楼2017-06-20 18:59:02
