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thli0572

铁虫 (初入文坛)

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专业: 病毒、病毒感染与宿主免疫

[求助] 重组子鉴定已有1人参与

我用的载体是pet-15b（5708bp），然后我的目的片段是816bp，连接转化后，挑的单克隆转接液体培养基培养，之后，分别以片段引物和载体引物做初步的鉴定，附图如下（图一），然后我挑了这三个阳性的克隆抽质粒，打算送测，图如下（图二）。
现在有几个地方不太明白，我的问题是：
1. 为什么以片段引物进行PCR时会有三条条带，是不是说这个克隆不纯？（PS：我在挑单克隆的时候确实很小心的严格的挑取的）
2. 抽提质粒后，为什么在5016和6133之间会有条带？按理说条带应该是6524bp，而且就算是以开环或是线状形式或者混有细菌基因组，那也应该比螺旋跑的慢，应该至少在6133以上吧？这个看上去有点单纯地像纯质粒，如果是，那岂不是说我这个克隆不纯，那会不会影响我后续的表达实验？
谢谢！

图一，pet-15b+cd6l重组子检测，片段（左）和质粒（右）引物.jpg