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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 怎样提高电击感受态细胞的转化效率
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i760912798

木虫 (正式写手)

[交流] 怎样提高电击感受态细胞的转化效率 已有5人参与

为提高电击转化效率，如果OD过低或过高都会使转化效率降低将导致实验的失败，怎样提高电击感受态细胞的转化效率
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1楼 2016-03-27 09:52:25
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maixiaodaou

新虫 (小有名气)
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电击转化杯提前遇冷，制作感受态时在菌液在它生长的对数期。

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2楼2016-03-27 15:42:55
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i760912798

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by maixiaodaou at 2016-03-27 15:42:55
电击转化杯提前遇冷，制作感受态时在菌液在它生长的对数期。

你制备过电转感受态细胞吗，有具体步骤参考一下吧！

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3楼2016-03-27 16:27:54
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maixiaodaou

新虫 (小有名气)
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3楼: Originally posted by i760912798 at 2016-03-27 16:27:54
你制备过电转感受态细胞吗，有具体步骤参考一下吧！
...

制备过，不知道你用什么菌，我用的农杆菌

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4楼2016-03-27 21:17:46
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i760912798

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by maixiaodaou at 2016-03-27 21:17:46
制备过，不知道你用什么菌，我用的农杆菌
...

我用的是大肠杆菌，制备大肠杆菌的电击感受态细胞
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5楼2016-03-28 08:22:35
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18716248350

新虫 (小有名气)
★
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大肠杆菌可以直接用化学转化啊，效率很高的！

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6楼2016-03-28 16:50:32
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i760912798

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 18716248350 at 2016-03-28 16:50:32
大肠杆菌可以直接用化学转化啊，效率很高的！

1.1kb的线性片段可以用氯化钙制备的感受态细胞进行转化吗？
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7楼2016-03-28 17:06:34
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I-Believe

新虫 (小有名气)
★
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TSS法制备大肠杆菌感受态效率高于氯化钙发，转化后复苏也可用营养更高的soc替代LB

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8楼2016-03-28 23:12:13
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普通回帖

hj200456

新虫 (初入文坛)
★
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你是做基因敲除的吧。1.可以把感受态细胞做得浓一点，就是最后一步少加一点溶液。2.线性片段浓度弄高一点。
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9楼2016-03-29 09:58:56
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i760912798

木虫 (正式写手)
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9楼: Originally posted by hj200456 at 2016-03-29 09:58:56
你是做基因敲除的吧。1.可以把感受态细胞做得浓一点，就是最后一步少加一点溶液。2.线性片段浓度弄高一点。

你敲除过基因吗？制备的电转感受态细胞一般分装多少ul,另外，加入感受态细胞的线性片段的量多少合适？
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10楼2016-03-29 10:11:32
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