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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菜鸟求助，完全不懂(╯3╰)
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what up

新虫 (初入文坛)

[求助] 菜鸟求助，完全不懂(╯3╰) 已有2人参与

现通过PCR获得一目的基因，其两端分别均带有BamH I和EcoR I限制酶位点。将其置于离心管A中用BamH I和EcoR I酶切；同时将质粒载体置于离心管B中，也用BamH I和EcoR I酶切。将A、B两管的酶切产物用T4 DNA连接酶连接。可能出现的连接产物的种类和形状有哪些？？？
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1楼 2016-03-26 15:00:30
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玉兔Jane

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
假设你后面转化大肠杆菌吧：抗性平板上长出来的单克隆，质粒类型：
1、切开的质粒+切开的PCR产物，连接起来，成为环，我们想要的结果。
2、没有连接目标片段的空载质粒质粒，原因：酶切不充分
没有切开，还是空质粒。
单酶切，T4连接成空质粒。
我说清楚没有？
赞一下 回复此楼
2楼2016-03-26 17:07:17
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任我逍遥江南

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
what up: 金币+3, ★★★很有帮助 2016-03-27 13:25:29
一，双酶切都成功后的连接，有正确的重组质粒      即  目的基因+载体。   
        还有就是自身环化，目的基因+目的基因     或者是    载体+载体
        上边的都是环状的
二，只有质粒双酶切成功，或只有目的基因双酶切成功，这个不能连接
三，只有一个酶切成功，这个结果就多了，有能连接的，也有不能，不过都是链状，
         木虫新人第一次回答，互相交流学习

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3楼2016-03-27 02:11:36
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