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[求助]
求助ELISA！！！
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ELISA菜鸟一枚，正在做ELISA,遇到问题了，周围没有人做，只好来小木虫求助各位大神了。 我做的是检测乳粉的抗原性，现在在确定抗原的包被浓度，一抗和二抗的工作浓度。但是每次加入TMB后都没有显色。希望大神们帮忙分析一下有可能是什么原因。以下是我的实验步骤： 1、用包被液包被抗原（β-LG)，抗原浓度分别为0.5、2.5、10、25、50ug/ml,从左到右依次加入板中，100ul/孔，4℃过夜。 2、次日，用洗涤液洗板4次，甩干。 3、加封闭液进行封闭，37℃放置45min。 4、洗涤 5、将兔抗β-LG用洗涤液从1:500对倍稀释，从上到下依次加入板中，100ul/L，37℃温育1h. 6、洗涤 7、将HRP-羊抗兔IgG用洗涤液稀释，加入100ul/孔，37℃温育1h。 8、洗涤 9、将等体积的TMB A液和B液混合，取100ul/孔加入板内，37℃避光温育。 ps:包被液：pH9.6 0.05mol/L碳酸盐缓冲液 洗涤液：pH7.4 PBST 封闭液：PBS+1%BSA+0.1%Tween-20 希望大家多多帮助！！！！ |
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