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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 生物效应评价 » 【求助】ROS的阳性对照？
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liujiahui

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助】ROS的阳性对照？

我用的是sigma的DCFH-DA，DMSO溶液20mM，工作时稀释1000倍。

我想先测一下材料本身能否产生ROS，再测细胞内的ROS水平。大家有在这种情况下测ROS吗？我是用能测荧光的酶标仪测的。我用20uM的H2O2做阳性对照，可是和不加H2O2的荧光差不多。0.4左右，应该算蛮弱的吧。这种情况下我是应该改变浓度呢？还是这样设对照就是不对的。

谢谢。

[ Last edited by liujiahui on 2008-10-20 at 15:16 ]
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1楼 2008-10-20 15:14:38
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liujiahui

木虫 (著名写手)
我查了查文献，好像明白了，呜呜呜呜。

DCFH-DA好像要在细胞内水解掉DA才能被氧化发荧光。

我的如意算盘打不成了。

我又舍不得又买DCFH，wuwu。
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2楼2008-10-20 16:06:53
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dj04164

木虫 (正式写手)
★ ★
zhangwj(金币+2,VIP+0):谢谢！
不对，这个染料后面的diacetate是为了起到cage的作用和有没有荧光无关，楼主的阳性对照出不来我想原因应该是H2O2水浓度不够，也有可能是孔板里面的带检测液体太少，再有DCFHDA染色细胞loading之后是要洗掉的，没有细胞的话就不能洗了，吸了之后就啥都没有了。呵呵，我觉得这个想法也挺好的，我已经做出来了，不管有没有diacetate只要被氧化都可以有荧光。
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3楼2009-01-13 12:44:06
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