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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » [求助] 蓝白斑筛选问题
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zuolili213

至尊木虫 (正式写手)

[交流] [求助] 蓝白斑筛选问题

做连接 大肠杆菌转化后我涂了两次平板,每次都不能长出单菌落,都是一片一片的 根本不能进行蓝白斑筛选 而且四板涂得浓度不同,分别为100  50   10  5 微升   这是怎么回事?浓度已经降得很低了 是抗生素不好使么?我们实验室其他人也是和我用的一样的抗生素Amp  X-Gal  IPTG   怎么我的就长不出单菌落呢?请各位虫友帮忙
[search]蓝白斑[/search]
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坚持就是胜利！
1楼 2008-10-20 08:28:30
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黑皮猩猩

铜虫 (初入文坛)
呵呵，如果是长的过密，可以用那四个板大体算下滴度，然后算好了再涂嘛~
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2楼2008-10-20 12:58:59
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恒星年

银虫 (正式写手)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-4 11:23
5ul都不行，很可能是amp失效了哦。否则你的转化效率也太高了吧？
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3楼2008-10-21 21:15:48
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helenfang

铜虫 (小有名气)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-4 11:23
感觉像是抗生素失效
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4楼2008-10-22 15:39:46
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smallcat227

木虫 (著名写手)
其他人用同样的抗生素没有问题……
重复过了么？
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5楼2008-10-22 18:24:40
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amberking

★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-4 11:22
你拿空菌加点AMP和LB的液体培养基，看长不长
如果长就是失效了
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6楼2008-10-23 14:23:58
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zuolili213

至尊木虫 (正式写手)
谢谢 朋友们的帮助  我和别的实验室师哥要了新的抗生素 重新做的  长出单菌落了  呵呵 应该是我用的那管不好使了 还是要谢谢大家的热情帮助
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坚持就是胜利！
7楼2008-10-23 20:48:45
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沧海蝴蝶

我也做的蓝白斑筛选，我的问题是不长菌，做的对照也不长（只有质粒载体，只有外源片段）。但都有一大片蓝色。涂的浓度是100、200.感受态细胞加的无菌水涂不含AMP长了一层均菌，说明感受态应该没问题，涂含AMP的平板好像中间长了一片，这是不是说明AMP有问题？AMP是60ug/ml。其他的不长菌也会有蓝色出现吗？我想让大家帮我分析一下这是什么情况？
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8楼2008-10-28 19:47:18
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