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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 切片相关 » 石蜡切片总脱片
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果果gxl2013

金虫 (小有名气)

[交流] 石蜡切片总脱片

各位前辈，我的石蜡切片出现了严重问题，请大家多多指教我的切片展完晾干后先烘烤1.5小时，做之前再烤2.5-3小时，可是一入二甲苯后，虽然没全掉，可是表面就出现渣样突起，通常经过几次洗涤后就掉了有没有前辈能支个招啊
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1楼 2016-03-23 13:48:23
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kop9831

金虫 (小有名气)
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果果gxl2013: 金币+1 2016-03-23 15:37:10
你先说说你一般烤片温度多少？我们是60度考15分钟，一般这时候蜡变成半液态，然后再梯度二甲苯脱蜡。
掉片的原因有很多，如玻片是否处理过APES，如果没处理的会很容易掉片。
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2楼2016-03-23 15:35:04
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果果gxl2013

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kop9831 at 2016-03-23 15:35:04
你先说说你一般烤片温度多少？我们是60度考15分钟，一般这时候蜡变成半液态，然后再梯度二甲苯脱蜡。
掉片的原因有很多，如玻片是否处理过APES，如果没处理的会很容易掉片。

我买的多聚赖氨酸包被的片子，60度考的，切完烤1.5小时，做前再烤2小时
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3楼2016-03-23 15:38:34
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kop9831

金虫 (小有名气)
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果果gxl2013: 金币+3 2016-03-23 15:59:06
引用回帖:
3楼: Originally posted by 果果gxl2013 at 2016-03-23 15:38:34
我买的多聚赖氨酸包被的片子，60度考的，切完烤1.5小时，做前再烤2小时...

烤的时间太长了吧，切完如果不是立刻就要做的话，37度烤干，或者晾一晚上就行，烤的时间过长不利于后面修复和组织的粘附。
你后面说的渣样突起就是蜡的凝结物，然后脱蜡过程中一般来说就是泡着静置，因为还没有到封闭那步，所以不能洗涤
一般步骤就是：烤片至蜡融-70%二甲苯-80%二甲苯-90%二甲苯-100%二甲苯-100%二甲苯-无水乙醇-无水乙醇-90%乙醇-80%乙醇-70%乙醇-修复，然后就封闭孵抗体那些了。
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4楼2016-03-23 15:55:56
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果果gxl2013

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by kop9831 at 2016-03-23 15:55:56
烤的时间太长了吧，切完如果不是立刻就要做的话，37度烤干，或者晾一晚上就行，烤的时间过长不利于后面修复和组织的粘附。
你后面说的渣样突起就是蜡的凝结物，然后脱蜡过程中一般来说就是泡着静置，因为还没有到 ...

我用的是纯的二甲苯，两道，各15分钟。现在片子已经烤过了，我只能试试二甲苯梯度了
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5楼2016-03-23 16:01:41
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匿名
本帖仅楼主可见
6楼2016-03-23 16:18:34
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kop9831

金虫 (小有名气)
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果果gxl2013: 金币+3 2016-03-23 16:33:03
引用回帖:
5楼: Originally posted by 果果gxl2013 at 2016-03-23 16:01:41
我用的是纯的二甲苯，两道，各15分钟。现在片子已经烤过了，我只能试试二甲苯梯度了...

梯度脱水的好处就在于，如果你捞片后组织层和玻璃面见有水，就不会一下连着蜡被脱掉
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7楼2016-03-23 16:24:24
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果果gxl2013

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by kop9831 at 2016-03-23 16:24:24
梯度脱水的好处就在于，如果你捞片后组织层和玻璃面见有水，就不会一下连着蜡被脱掉...

非常感谢。我再试试吧······
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8楼2016-03-23 16:33:39
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star013

新虫 (知名作家)
★ ★
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果果gxl2013: 金币+1 2016-03-25 08:53:13
我们公司能帮您做切片实验

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9楼2016-03-23 21:39:43
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北城风雪

木虫 (正式写手)
★ ★
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果果gxl2013: 金币+1 2016-03-25 08:54:38
你的载玻片前期处理了没有，载玻片不是拿来就可以用的，得先用洗液浸泡，然后流水冲洗，酒精里保存后擦干，再进行后期处理，基本不会掉片。
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有所为，无所谓
10楼2016-03-25 00:25:09
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