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果果gxl2013

金虫 (小有名气)

[交流] 石蜡切片总脱片

各位前辈,我的石蜡切片出现了严重问题,请大家多多指教我的切片展完晾干后先烘烤1.5小时,做之前再烤2.5-3小时,可是一入二甲苯后,虽然没全掉,可是表面就出现渣样突起,通常经过几次洗涤后就掉了有没有前辈能支个招啊
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kop9831

金虫 (小有名气)

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果果gxl2013: 金币+1 2016-03-23 15:37:10
你先说说你一般烤片温度多少?我们是60度考15分钟,一般这时候蜡变成半液态,然后再梯度二甲苯脱蜡。
掉片的原因有很多,如玻片是否处理过APES,如果没处理的会很容易掉片。
比较擅长做图,尤其是SCI投稿用的,常用工具:PS、AI、Image-Pro、GraphpadPrism
2楼2016-03-23 15:35:04
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果果gxl2013

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kop9831 at 2016-03-23 15:35:04
你先说说你一般烤片温度多少?我们是60度考15分钟,一般这时候蜡变成半液态,然后再梯度二甲苯脱蜡。
掉片的原因有很多,如玻片是否处理过APES,如果没处理的会很容易掉片。

我买的多聚赖氨酸包被的片子,60度考的,切完烤1.5小时,做前再烤2小时
3楼2016-03-23 15:38:34
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kop9831

金虫 (小有名气)

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果果gxl2013: 金币+3 2016-03-23 15:59:06
引用回帖:
3楼: Originally posted by 果果gxl2013 at 2016-03-23 15:38:34
我买的多聚赖氨酸包被的片子,60度考的,切完烤1.5小时,做前再烤2小时...

烤的时间太长了吧,切完如果不是立刻就要做的话,37度烤干,或者晾一晚上就行,烤的时间过长不利于后面修复和组织的粘附。
你后面说的渣样突起就是蜡的凝结物,然后脱蜡过程中一般来说就是泡着静置,因为还没有到封闭那步,所以不能洗涤
一般步骤就是:烤片至蜡融-70%二甲苯-80%二甲苯-90%二甲苯-100%二甲苯-100%二甲苯-无水乙醇-无水乙醇-90%乙醇-80%乙醇-70%乙醇-修复,然后就封闭孵抗体那些了。
比较擅长做图,尤其是SCI投稿用的,常用工具:PS、AI、Image-Pro、GraphpadPrism
4楼2016-03-23 15:55:56
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果果gxl2013

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by kop9831 at 2016-03-23 15:55:56
烤的时间太长了吧,切完如果不是立刻就要做的话,37度烤干,或者晾一晚上就行,烤的时间过长不利于后面修复和组织的粘附。
你后面说的渣样突起就是蜡的凝结物,然后脱蜡过程中一般来说就是泡着静置,因为还没有到 ...

我用的是纯的二甲苯,两道,各15分钟。现在片子已经烤过了,我只能试试二甲苯梯度了
5楼2016-03-23 16:01:41
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本帖仅楼主可见
6楼2016-03-23 16:18:34
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kop9831

金虫 (小有名气)

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果果gxl2013: 金币+3 2016-03-23 16:33:03
引用回帖:
5楼: Originally posted by 果果gxl2013 at 2016-03-23 16:01:41
我用的是纯的二甲苯,两道,各15分钟。现在片子已经烤过了,我只能试试二甲苯梯度了...

梯度脱水的好处就在于,如果你捞片后组织层和玻璃面见有水,就不会一下连着蜡被脱掉
比较擅长做图,尤其是SCI投稿用的,常用工具:PS、AI、Image-Pro、GraphpadPrism
7楼2016-03-23 16:24:24
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果果gxl2013

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by kop9831 at 2016-03-23 16:24:24
梯度脱水的好处就在于,如果你捞片后组织层和玻璃面见有水,就不会一下连着蜡被脱掉...

非常感谢。我再试试吧······
8楼2016-03-23 16:33:39
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star013

新虫 (知名作家)


★ ★
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果果gxl2013: 金币+1 2016-03-25 08:53:13
我们公司能帮您做切片实验

发自小木虫Android客户端
9楼2016-03-23 21:39:43
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北城风雪

木虫 (正式写手)

★ ★
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果果gxl2013: 金币+1 2016-03-25 08:54:38
你的载玻片前期处理了没有,载玻片不是拿来就可以用的,得先用洗液浸泡,然后流水冲洗,酒精里保存后擦干,再进行后期处理,基本不会掉片。
有所为,无所谓
10楼2016-03-25 00:25:09
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