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qibingli金虫 (小有名气)
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[交流]
乳酸菌表达
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本人正在做传染性法氏囊病毒 (IBDV)VP2基因的乳酸菌表达,重组质粒经酶切、PCR鉴定都正确(本人是先连T载体,测序正确后,再从T载体上切下,连接在表达载体上的),所以连接在表达载体上,就没有测序,应该不会有碱基突变或插入和缺失吧。不同的表达条件都试过了,可就是没有搞明白到底是否表达,SDS—PAGE看不出是否表达(本表达系统的表达量很低)、Western-blotting检测没有带(连杂带都没有),请各为好心的虫友帮忙分析一下原因,帮忙想一想办法,推荐一个可行的实验策略,或者给推荐一个基因优化的方法。如果您再这方面很强的话,请留下您的QQ号码好吗,以方便我向您请教,我的QQ号码:425214389。基因序列如下: ATGACGAACCTGCAAGATCAAACCCAACAGATTGTTCCGTTCATACGGAGCCTTCTGATGCCAACAACCGGACCGGCGTCCATTCCGGACGACACCCTAGAGAAGCACACTCTCAGGTCAGAGACCTCGACCTACAATTTGACTGTGGGGGACACAGGGTCAGGGCTAATTGTCTTTTTCCCTGGTTTCCCTGGCTCAATTGTGGGTGCTCACTACACACTGCAGAGCAATGGGAACTACAAGTTCGATCAGATGCTCCTGACTGCCCAGAACCTACCGGCCAGCTACAACTACTGCAGGCTAGTGAGTCGGAGTCTCACAGTGAGGTCAAGCACACTCCCTGGTGGCGTTTATGCACTAAATGGCACCATAAACGCCGTGACCTTCCAAGGAAGCCTGAGTGAACTGACAGATGTTAGCTACAATGGGTTGATGTCTGCAACAGCCAACATCAACGACAAAATCGGGAACGTCCTAGTAGGGGAAGGGGTAACCGTCCTCAGCTTACCCACATCATATGATCTTGGGTATGTGAGACTCGGTGACCCCATTCCCGCTATAGGGCTCGACCCAAAAATGGTAGCAACATGTGACAGCAGTGACAGGCCCAGAGTCTACACCATAACTGCAGCCGATGATTACCAATTCTCATCACAGTACCAAGCAGGTGGGGTAACAATCACACTGTTCTCAGCTAATATCGATGCCATCACAAGCCTCAGCATCGGGGGAGAACTCGTGTTTCAAACAAGCGTCCAAGGCCTTATACTGGGTGCTACCATCTACCTTATAGGCTTTGATGGGACTGCGGTAATCACCAGAGCTGTGGCCGCAGACAATGGGCTAACGGCCGGCACTGACAACCTTATGCCATTCAATATTGCGATTCCAACCAGCGAGATAACCCAGCCAATCACATCCATCAAACTGGAGATAGTGACCTCCAAAAGTGGTGGTCAGGCGGGGGATCAGATGTCATGGTCAGCAAGTGGGAGCCTAGCAGTGACGATCCACGGTGGCAACTATCCAGGGGCCCTCCGTCCCGTCACACTAGTAGCCTACGAAAGAGTGGCAACAGGATCTGTCGTTACGGTCGCCGGGGTGAGCAACTTCGAGCTGATCCCAAATCCTGAACTAGCAAAGAACCTGGTCACAGAATACGGCCGATTTGACCCAGGAGCTATGAACTACACAAAATTGATACTGAGTGAGAGGGACCGTCTTGGCATCAAGACCGTATGGCCAACAAGAGAGTACACTGACTTTCGCGAGTACTTCATGGAGGTGGCCGACCTCAACTCTCCCCTCAAGATTGCAGGAGCATTTGGCTTCAAAGACATAGTCCGGGCCCTAAGGAGGATAGCT |
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