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yilishanshan

木虫 (正式写手)

大星星

[求助] HPLC测定兽药(恩诺沙星),色谱柱变短了,怎么不出峰呢? 已有1人参与

做兽药(恩诺沙星)残留量检测,高效液相色谱-荧光检测,国标方法是用色谱柱C18 4.6×250mm,5μm,流动相:乙腈-水=18:82,流速0.8mL/min
恩诺沙星的保留时间在16min左右。

实验室没有长柱子,我用的是C18 4.6×100mm,3.5μm。流动相:乙腈-水=20:80,流速1mL/min。进了一针恩诺沙星对照品,3min左右出个峰,峰型也不太好,感觉和溶剂峰差不多。不确定是不是恩诺沙星,但之后跑了1个小时都没东西出来。
之后又进个对照,条件改成乙腈-水=10:90,想着峰会不会延后,在10min左右出峰。但竟然跑了好久,也没东西出来。

请问大家是怎么回事呢?色谱柱太短了,做不出吗?
相同比例的流动相,色谱柱变短,粒径也变小了,同一物质的保留时间是缩短还是延迟?

下面是国标方法做出的图:

HPLC测定兽药(恩诺沙星),色谱柱变短了,怎么不出峰呢?
无标题.jpg
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去做自己想做的
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zhangyuming

铁虫 (正式写手)

流速有点大,是不是直接就没分离就冲跑了。或是进样量会不会有点小,灵敏度不行啊

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2楼2016-03-20 22:03:01
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zongyuan

捐助贵宾 (知名作家)

你难道是做气相的,我第一遍没看出破绽,还需要看第二遍

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3楼2016-03-20 22:27:51
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zongyuan

捐助贵宾 (知名作家)

颗粒变小,出峰就会越晚,这时你应该加大有机相比例,你反而给减小了,你可以试试25%,如果没出峰,加大有机相比例,出峰太早,减小比例

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4楼2016-03-20 22:31:00
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zongyuan

捐助贵宾 (知名作家)

还有个问题,如果是不同品牌的色谱柱,即使规格相同,出峰时间也不会相同

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5楼2016-03-20 22:32:40
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xiao_meme

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by zongyuan at 2016-03-20 22:32:40
还有个问题,如果是不同品牌的色谱柱,即使规格相同,出峰时间也不会相同

如果是乙腈跟磷酸溶液呢

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6楼2018-03-26 13:46:05
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孤独的风

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

刚好做这个试验,国标上是用磷酸/乙酸铵-乙腈,不是水-乙腈啊。
怀念往事
7楼2022-08-12 10:21:52
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