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[求助]
双向电泳遇到贯穿条带是怎么回事？
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1. 裂解缓冲液（7M 尿素, 2M 硫尿, 0.5% TritonX-100, 20 mM DTT, 1.2% phamalyte （4-7）, 4% CHAPS） 2. 胶条的pH范围为 pH 4–7，17cm胶条。左到右是负极到正极。 3. 电泳条件按如下程序进行：除盐250V, 3h→除盐500V, 1h→升压1000V, 1h→8500V, 3h，总伏时为70000KV•h。 4.问题分析：a. 聚焦好像是不完全，电压达不到8000v，蛋白点主要分布在一侧，有贯穿带出现。b. 用的GE的蛋白纯化试剂盒纯化的，但是还是有问题，不知道是不是蛋白纯化的问题，需要再纯化蛋白还是增加聚焦时间？做了一个月了，还是这样，亲们，求指点。帮帮我，很捉急。  222.jpg |
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