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鸿鹄00000

银虫 (小有名气)

[求助] 大肠杆菌从-80度冰箱活化后,保存在-4度冰箱备用,保存时必须避光吗?! 已有1人参与

我做的大肠杆菌从-80度冰箱中活化,以液体LB培养基和LB平板形式在-4度冰箱中保存备用,6天后取出液体LB培养基中的以1:50培养,37度,200装/分,2个小时候测OD600只有0.2几;起初第一次做时,同样2小时,测的就是0.7多,这难道是菌退化了吗?还是在-4度冰箱里保存的问题(-4度冰箱是透明的门,可透光)?难道是大肠在-4度保存时要避光吗?求大神们帮忙解答!!!
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好好学习,天天向上
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zhangbest007

木虫 (正式写手)

学无止境
2楼2016-03-18 22:30:16
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
菌生长的浓度和你保存种子浓度和接种量也是有关的,不明白你-80活化完后,为什么不是保存甘油管冷冻保存,而是将摇好的菌放4度?当然放4°通常是我们暂存的方式,比如几小时后进行转接或者第二天转接,懒得重新摇菌可以这样(理论上如果第二天才用菌液,建议是重新转接培养),菌液放一周以上,我建议你还是不要用了,有这么久的准备时间,在你要使用前为什么不选择从单菌落平板上挑单菌落过夜培养,或者甘油管重新转接呢?祝好。

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
3楼2016-03-19 07:38:23
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鸿鹄00000

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-19 07:38:23
菌生长的浓度和你保存种子浓度和接种量也是有关的,不明白你-80活化完后,为什么不是保存甘油管冷冻保存,而是将摇好的菌放4度?当然放4°通常是我们暂存的方式,比如几小时后进行转接或者第二天转接,懒得重新摇菌 ...

我是在-80活化之后取出一小部分发酵培养,剩下的还有不少部分,所以就放在-4度先保存着,等着过几天还得再用。就是在距第一次发酵5天后,再进行一次发酵,其活性就差的很多了
好好学习,天天向上
4楼2016-03-19 10:14:20
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 鸿鹄00000 at 2016-03-19 10:14:20
我是在-80活化之后取出一小部分发酵培养,剩下的还有不少部分,所以就放在-4度先保存着,等着过几天还得再用。就是在距第一次发酵5天后,再进行一次发酵,其活性就差的很多了...

嗯,理解,我们做发酵种子也会这样放着,只是最多也就两天后继续上罐,你这中间毕竟有五天时间呢,第四天重新转接一下过夜培养不是更好么

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
5楼2016-03-19 10:20:35
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鸿鹄00000

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-19 10:20:35
嗯,理解,我们做发酵种子也会这样放着,只是最多也就两天后继续上罐,你这中间毕竟有五天时间呢,第四天重新转接一下过夜培养不是更好么
...

那大肠是不是避光下保存要比见光下保存好一些呢(我用的-4度冰箱是透光的门)
好好学习,天天向上
6楼2016-03-19 16:23:44
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 鸿鹄00000 at 2016-03-19 16:23:44
那大肠是不是避光下保存要比见光下保存好一些呢(我用的-4度冰箱是透光的门)...

这个影响不大的,蓝白斑的板子放4°也可以的,问题只是4°不是长时间保存菌液的地方,还是存个甘油管,放负20°吧,什么时候用就提前接,菌活力也好,祝好!

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
7楼2016-03-19 17:54:35
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十八子皿

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-19 17:54:35
这个影响不大的,蓝白斑的板子放4°也可以的,问题只是4°不是长时间保存菌液的地方,还是存个甘油管,放负20°吧,什么时候用就提前接,菌活力也好,祝好!
...

请问大肠直接从平板挑到锥形瓶活化没关系吧,单纯做发酵的话LB里边还需要加氨苄吗?(新手刚接触微生物)鞋鞋
8楼2017-02-22 20:49:13
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