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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » iptg诱导大肠杆菌表达
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日落沙发

新虫 (小有名气)

[求助] iptg诱导大肠杆菌表达 已有2人参与

我做了重组质粒，一个蛋白和荧光蛋白的结合，然后转导到大肠杆菌中。
用iptg诱导载体质粒表达，蛋白和荧光蛋白结合的产物。
但现在出现了大肠杆菌不游动的情况。
经过一些实验验证，发现加入iptg的时候，od的值对结果有一定影响。
但是还是没有达到想要的结果，游动虽然有，但还是不正常。
想问iptg诱导，诱导的时间点和温度对细菌表达可溶性蛋白的产物有多大影响？
求各位大神解答～

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1楼 2016-03-17 13:42:39
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nyjznj2010

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 日落沙发 at 2016-03-18 11:07:47
在od较大时，积累了大量菌体，所以此时加iptg，蛋白表达量较高。
是指每个菌体表达蛋白量不变，而由于菌体数目增多，导致整体蛋白表达量较高，还是每个菌体在接受iptg不同诱导时间，自身所产生的蛋白量也会发生变化 ...

对数期后期，单个菌体状态比较稳定，菌体总量也不再增多，这时候体系中的N源一般主要用于蛋白表达了，这个时期，不但菌体量积累了，同时单个菌体的蛋白的表达量也相对较高。好比说对数前期是用来长个的，对数后期才是用来干活儿的！
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日落沙发
12楼2016-03-21 13:18:12
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日落沙发

新虫 (小有名气)
顶顶?

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2楼2016-03-17 13:43:14
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日落沙发

新虫 (小有名气)


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3楼2016-03-17 16:59:00
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nyjznj2010

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般不都是在对数生长后期开始诱导的嘛！你可以试试确定一下你这个菌种的生长曲线，一般重组大肠都可以用LB培养基培养的，37℃摇床培养的话，每一个小时取一下样，测个OD值，直到OD不再变化，这个时间点前后就可以加入IPTG诱导了。还有就是每次的接种量不同的话，达到对数生长后期的时间也不一样咧！如果是37摄氏度发酵罐培养的，经验上一般接种后4个小时左右就可以诱导了。看你的培养条件了。
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日落沙发
4楼2016-03-17 17:11:20
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