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adam31370

新虫 (初入文坛)

[求助] 热带假丝酵母菌敲除 已有2人参与

选用G418为抗生素,电转之后,能在含G418培养基上生长,然后做了菌落pcr,但是没有相关g418抗性基因出来,请问什么原因?
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丫头hhh

新虫 (小有名气)

5楼2016-05-18 10:52:06
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你要敲除的是什么基因呢,靠G418 抗性基因来筛选克隆?不清楚你这个假丝酵母做菌落pcr条件怎么样,我们做毕赤酵母时,常常要把菌落煮一下,离心取上清进pcr验证,祝好!

发自小木虫Android客户端
天空才是极限,我有信心飞的更高!
2楼2016-03-17 12:05:14
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zhuaizhuaihj

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-17 12:05:14
你要敲除的是什么基因呢,靠G418 抗性基因来筛选克隆?不清楚你这个假丝酵母做菌落pcr条件怎么样,我们做毕赤酵母时,常常要把菌落煮一下,离心取上清进pcr验证,祝好!
...

请问有G418抗性基因?
3楼2016-03-23 15:31:09
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mysky6017

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

有两个可能原因:
1. 假阳性。
2. 做菌落pcr时破壁不成功。

另外能够问下lz所用g418的浓度及质粒体系吗?
4楼2016-04-21 16:58:21
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