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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 热带假丝酵母菌敲除
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adam31370

新虫 (初入文坛)

[求助] 热带假丝酵母菌敲除 已有2人参与

选用G418为抗生素，电转之后，能在含G418培养基上生长，然后做了菌落pcr，但是没有相关g418抗性基因出来，请问什么原因？
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1楼 2016-03-17 10:08:06
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你要敲除的是什么基因呢，靠G418 抗性基因来筛选克隆？不清楚你这个假丝酵母做菌落pcr条件怎么样，我们做毕赤酵母时，常常要把菌落煮一下，离心取上清进pcr验证，祝好！

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
2楼2016-03-17 12:05:14
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zhuaizhuaihj

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-17 12:05:14
你要敲除的是什么基因呢，靠G418 抗性基因来筛选克隆？不清楚你这个假丝酵母做菌落pcr条件怎么样，我们做毕赤酵母时，常常要把菌落煮一下，离心取上清进pcr验证，祝好！
...

请问有G418抗性基因？
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3楼2016-03-23 15:31:09
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mysky6017

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

有两个可能原因：
1. 假阳性。
2. 做菌落pcr时破壁不成功。

另外能够问下lz所用g418的浓度及质粒体系吗？
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4楼2016-04-21 16:58:21
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丫头hhh

新虫 (小有名气)
哈哈哈，竟然遇到你

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5楼2016-05-18 10:52:06
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