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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » POD测定结果不稳定为什么
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aoyunshu

铁虫 (小有名气)

[交流] POD测定结果不稳定为什么

POD酶测定时加终止液以后，比色的时候数值一直变化，为什么？请教原因，谢谢！ 5个金币奖励
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1楼 2008-10-17 11:06:19
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brassica227

铁虫 (小有名气)
你用的方法可能不太好，现在都用酶动力学测酶活性，不需要加入终止液，线性很好的

你是用什么方法
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2楼2008-10-17 15:10:26
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big9378

铁虫 (初入文坛)
你在测定之前是否把仪器打开预热了。仪器预热时间不够也会影响测定过程中数据上下浮动。
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3楼2008-10-18 08:55:04
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aoyunshu

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by brassica227 at 2008-10-17 15:10:
你用的方法可能不太好，现在都用酶动力学测酶活性，不需要加入终止液，线性很好的

你是用什么方法

谢谢!能提供一个具体方法的文献吗?
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4楼2008-10-18 09:16:19
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shwang007

木虫 (正式写手)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢~
下面提供具体的测定方法，仅供参考：
取0.5g根或叶片按1：5的比例加入酶提取液(0.05mmol/L pH8.7的硼酸缓冲液，含2mmol/L的亚硫酸氢钠)，冰浴研磨至匀浆，4℃冷冻离心（10000×g , 30 min），取上清液作为待测酶液。POD 活力测定参照Hammerschmidt(1982)等的方法稍加改进，反应体系以愈创木酚（0.25%）和过氧化氢（0.75%）为底物，适量酶液启动反应，每隔30秒测定460nm吸光值，连续测定3分钟，计算酶促反应速度
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5楼2008-10-18 16:53:49
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aoyunshu

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by shwang007 at 2008-10-18 16:53:
下面提供具体的测定方法，仅供参考：
取0.5g根或叶片按1：5的比例加入酶提取液(0.05mmol/L pH8.7的硼酸缓冲液，含2mmol/L的亚硫酸氢钠)，冰浴研磨至匀浆，4℃冷冻离心（10000×g , 30 min），取上清液作为待测酶 ...

谢谢!
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6楼2008-10-18 20:12:15
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