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小李纸11

银虫 (正式写手)

[求助] 求助,现在需要自己构建重组质粒,怎样选择合适的限制性内切酶呢。。。已有3人参与

我已经把含有目的基因的质粒从大肠杆菌里提出来了,现在需要把它从该质粒上切下来,然后连接到毕赤酵母的空质粒上,请问我该如何选择合适的酶进行切割呢?需要考虑的因素有哪些呢?还有。。。是用双酶切还是单酶切比较合适呢?谢谢啦。。。
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晃晃飞天

新虫 (正式写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-16 19:10:23
换个人估计都要嫌弃我啰嗦了
...

是真的好详细,好热心!32个赞

发自小木虫Android客户端
12楼2016-03-16 20:24:45
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
额,根据表达载体或者所用相关载体设计酶切位点,这个不应该是在试验开始前就确定的么?用含有相关酶切位点的引物去扩增你的片段,然后构建克隆载体,然后再酶切连接构建么?
2楼2016-03-15 11:28:45
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小李纸11

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-15 11:28:45
额,根据表达载体或者所用相关载体设计酶切位点,这个不应该是在试验开始前就确定的么?用含有相关酶切位点的引物去扩增你的片段,然后构建克隆载体,然后再酶切连接构建么?

现在的状态就是像题干里说的那样,然后那个目的基因老师做了载体构建,不过把它连接到PT7载体上了,他说PT7载体不能用于表达,需要把目的基因导入到真核系统,也就是毕赤酵母载体上表达,所以要把它从PT7载体上切下来,再连到毕赤酵母空载体上,,,好难呐,对于没有什么基因工程基础的我来说。。。然后选了酶以后还要给空载体加上保护碱基才能切,还要保证切完连上去的碱基不能移码什么的。。。
3楼2016-03-15 11:55:55
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仇峰12306

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
那你知道你的载体上有什么酶切位点吗?你的空载体是T载体还是什么啊?老师没给你目的片段的序列吗?
4楼2016-03-15 13:24:33
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