| 查看: 7167 | 回复: 6 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
过表达载体的构建
|
||
|
我是个本科小白。对实验一窍不通，最近想弄清楚“”用转基因拟南芥分析外源基因功能“”类似实验的原理、方法技术和步骤。希望师兄师姐指出我的错误：目的基因有两个转录本，①先提取总mRNA，②用RT-PCR扩增cDNA，电泳回收。③产物与pMD18-T载体连接，转化大肠杆菌，挑选阳性克隆。④培养提取重组质粒然后与pCAMBIA1301质粒进行双酶切《这里我搞不懂，双酶切后pMD18-T载体是否还在上面，还是酶切之后只剩下需要的目的基因了，求前辈解答》。⑤酶切产物进行电泳回收然后连接。⑥转化农杆菌GV3101《请问怎么筛选出转化成功的农杆菌呢？》⑦农杆菌侵染拟南芥⑧抗性筛选转化子。PS：我是小白，问的不对的地方，望见谅，我想自己设计一个实验过程，求帮忙，谢谢！ 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急
已经有17人回复
-
考博求助
已经有3人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急
已经有5人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急
已经有4人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急
已经有5人回复
-
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有9人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有9人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急
已经有10人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急
已经有6人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急
已经有9人回复
3楼2016-03-15 11:12:55
|
引物需要加酶切为点，与1301的为点对应，注意选的酶切为点序列上不能有。T载体最好用sample吧。酶切后只回收你的目的片段，载体片段不要回收，关于你的问题酶切就是两刀两段，你的目的片段一段，载体一段。然后连在1301上就行。 发自小木虫Android客户端 |
2楼2016-03-13 16:10:21
star013 
新虫 (知名作家)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1488.5
- 散金: 831
- 红花: 33
- 帖子: 5395
- 在线: 493.3小时
- 虫号: 1401381
- 注册: 2011-09-14
- 专业: 法学
4楼2016-03-15 12:55:25
5楼2016-03-16 00:42:00
10