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i760912798木虫 (正式写手)
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[交流]
ET/Red重组系统 已有2人参与
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| 使用ET/Red重组系统，扩增同源重组片段，连T载体后测序验证，同源臂序列突变很多，是怎么回事，怎样避免同源臂突变呢？如果无法避免同源臂序列突变，突变几个不影响同源重组效率呢？ |
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i760912798
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我也是首次利用red重组系统敲除基因，已经1个多月了，一点进展也没有，就是卡到重组片段上了。你用普通taq酶扩增重组片段后就成功了缺失基因了，你是怎么做到的？ 发自小木虫Android客户端 |
6楼2016-03-13 11:29:46
安静de执着14
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你这是要用Red重组敲除目的基因吗？之前我做过敲除，同源臂扩增后直接用于同源重组，并没有再进行测序。只要你的同源臂在40-60bp左右，重组应该没问题。 发自小木虫Android客户端 |
2楼2016-03-13 09:53:12
wang2568
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3楼2016-03-13 10:07:53
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我用的是长引物扩增同源臂和抗性基因的，用的是普通的taq酶，连T载体测序，同源臂有突变，将pcr产物直接电转后涂板也没有克隆长出，你们用的同源臂多大，用什么酶扩的，存在突变吗？ 发自小木虫Android客户端 |
4楼2016-03-13 10:55:50
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