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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌落pcr无目标条带
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xuyanting1

新虫 (初入文坛)

[交流] 菌落pcr无目标条带 已有12人参与

连接后，进行蓝白斑筛选转化入大肠杆菌感受态，14h后挑白斑进行菌落pcr，跑电泳无目标条带，请问是什么原因

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1楼 2016-03-12 17:42:52
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xuyanting1

新虫 (初入文坛)
菌落pcr

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2楼2016-03-12 17:43:39
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原海亮

木虫 (著名写手)
★
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菌落pcr不靠谱，还是提质粒酶切吧

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
3楼2016-03-12 18:55:21
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xuyanting1

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-12 18:55:21
菌落pcr不靠谱，还是提质粒酶切吧

谢谢

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4楼2016-03-13 09:02:56
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安静de执着14

新虫 (著名写手)
★
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有可能是假阳性，多挑选几个白斑进行PCR鉴定，对电泳有目的条带的再提质粒酶切。我觉得，最好是挑取白斑后再液体培养一下，如果验证是重组子，那么这个菌液可以留着备用。

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5楼2016-03-13 09:57:27
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wang2568

银虫 (小有名气)
★
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挑了几个都没有条带，可以继续摇菌提取质粒再扩增

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2016-03-13 10:02:03
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yeruge

新虫 (小有名气)
★
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我每次菌落pcr也没条带，就直接拿去测序了。你心里有把握就拿去测序吧

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7楼2016-03-13 10:28:44
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2354889378
11
8楼2016-03-13 11:26:21
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DNTP

金虫 (正式写手)
★
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首先看你ＰＣＲ有没有问题，设阳性对照看有没有条带
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9楼2016-03-14 08:54:18
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linxia_yuer

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果目的基因pcr的时候本来就比较困难，做菌液pcr就很可能出现假阴性。可以提质粒做pcr或者酶切来鉴定。
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10楼2016-03-14 10:18:22
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