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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌落pcr无目标条带
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袁小伟

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
一定要设计阳性对照，可以知道自己PCR过程有没有问题，其次是要多挑几个，因为假阳性是很常见的，菌落PCR如果引物设计的好的话还是容易P出来的。
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11楼2016-03-15 09:06:39
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xuyanting1

新虫 (初入文坛)
谢谢

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12楼2016-03-15 09:19:44
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prthefu

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我目前也在做这块，我一般都是挑菌落后37℃培养6h，对于那些长起来的，先做pcr、跑胶鉴定，然后再送去测序。
目前，还没有做质粒酶切，还不懂那是什么···
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nothing is impossible in this world，if you have the will to win，you can achieve anything
13楼2016-03-16 09:25:34
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kingjazz23

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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5楼: Originally posted by 安静de执着14 at 2016-03-13 09:57:27
有可能是假阳性，多挑选几个白斑进行PCR鉴定，对电泳有目的条带的再提质粒酶切。我觉得，最好是挑取白斑后再液体培养一下，如果验证是重组子，那么这个菌液可以留着备用。
...

你好 你说的用菌液培养一下是要做菌液PCR吗？

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14楼2016-04-13 15:12:15
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xiakaide

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by linxia_yuer at 2016-03-14 10:18:22
如果目的基因pcr的时候本来就比较困难，做菌液pcr就很可能出现假阴性。可以提质粒做pcr或者酶切来鉴定。

非常赞同

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15楼2016-04-13 15:19:59
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kingjazz23

金虫 (小有名气)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
11楼: Originally posted by 袁小伟 at 2016-03-15 09:06:39
一定要设计阳性对照，可以知道自己PCR过程有没有问题，其次是要多挑几个，因为假阳性是很常见的，菌落PCR如果引物设计的好的话还是容易P出来的。

我想问一下菌落PCR用的引物不是通用引物吗

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16楼2016-04-13 15:29:59
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kingjazz23

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
11楼: Originally posted by 袁小伟 at 2016-03-15 09:06:39
一定要设计阳性对照，可以知道自己PCR过程有没有问题，其次是要多挑几个，因为假阳性是很常见的，菌落PCR如果引物设计的好的话还是容易P出来的。

还有我想问问如何做阳性对照

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17楼2016-04-13 15:35:54
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yangdl1023

木虫 (正式写手)

Panggong
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
http://www.nature.com/nprot/journal/v9/n2/abs/nprot.2014.029.html,这篇nature protocal有关于菌落pcr问题的分析，
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18楼2016-04-13 15:42:45
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xuyanting1

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by kingjazz23 at 2016-04-13 15:12:15
你好 你说的用菌液培养一下是要做菌液PCR吗？
...

嗯

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19楼2016-04-13 22:38:05
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