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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS-page中loading buffer添加2-ME的影响
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杜鹃羽

金虫 (初入文坛)

[交流] SDS-page中loading buffer添加2-ME的影响

各位大侠，近日小弟在纯化蛋白（HIS标签），纯化后跑PAGE，前几次用的loadingbuffer是没有β-巯基乙醇的，跑出来在目的条带附近一直出现两条带（如图1），刚开始不知道，然后又纯化两批，忧伤了一周……之后怀疑哪方面有问题的时候怀疑到loadingbuffer，开始用有β-巯基乙醇的buffer，然后就跑出来一条带（如图2）。现在就是很好奇这是咋回事儿，二硫键？还望各位能指点一二（我的蛋白是大肠杆菌表达，收的包涵体的）

SDS-page中loading buffer添加2-ME的影响
图 1.jpg


SDS-page中loading buffer添加2-ME的影响-1
图 2.jpg
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1楼 2016-03-11 08:44:55
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匿名
本帖仅楼主可见
2楼2016-03-11 09:03:22
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虫虫笑了

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也搞不懂为什么，但我自己做的时候感觉加了巯基乙醇之后跑出来的条带细一些，不会很粗
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1111
3楼2016-04-06 21:51:46
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RyanKai

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
loading buffer 是一定要加巯基乙醇的
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4楼2017-08-29 18:09:21
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李敏40409

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
1楼: Originally posted by 杜鹃羽 at 2016-03-11 08:44:55
各位大侠，近日小弟在纯化蛋白（HIS标签），纯化后跑PAGE，前几次用的loadingbuffer是没有β-巯基乙醇的，跑出来在目的条带附近一直出现两条带（如图1），刚开始不知道，然后又纯化两批，忧伤了一周……之后怀疑哪方 ...

请问巯基乙醇加多少？

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5楼2018-02-01 22:55:39
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