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[求助]
pPICZαA载体表达问题
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大神们，求助一下！用pPICZαA载体表达一条曲霉的基因（2400bp左右），电转进GS115，做了四五次，每次都能用特异性引物从抗性平板上挑出阳性来，通用引物有时能挑出来，但挑出的阳性摇瓶后测没有酶活，SDS-PAGE银染后条带特淡，不确定有没有表达。因为第一次用这个载体做，也没有经验，照着说明书做的。发现几个问题不知道会不会影响实验结果。 1.电转后涂菌体在YPDS1mg/ml的Z抗平板上，长出单菌落得3、4天，是不是Z抗失效了才长出来? 2.跟实验室同学一起做的，他用的是9K载体，电转后在MD平板上也用特异性引物挑出来了，但是也没有酶活，跑胶的蛋白也条带很淡。特异性引物挑单菌落和通用引物挑阳性会很有差别吗？ 3.线性化的时候，线性化后的条带是不是比未线性化的质粒跑的慢，因为同学的线性化后跑的比质粒快，这个是什么原因啊？ |
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