| 查看: 1476 | 回复: 0 | ||
[求助]
pPICZαA载体表达问题
|
|
大神们，求助一下！用pPICZαA载体表达一条曲霉的基因（2400bp左右），电转进GS115，做了四五次，每次都能用特异性引物从抗性平板上挑出阳性来，通用引物有时能挑出来，但挑出的阳性摇瓶后测没有酶活，SDS-PAGE银染后条带特淡，不确定有没有表达。因为第一次用这个载体做，也没有经验，照着说明书做的。发现几个问题不知道会不会影响实验结果。 1.电转后涂菌体在YPDS1mg/ml的Z抗平板上，长出单菌落得3、4天，是不是Z抗失效了才长出来? 2.跟实验室同学一起做的，他用的是9K载体，电转后在MD平板上也用特异性引物挑出来了，但是也没有酶活，跑胶的蛋白也条带很淡。特异性引物挑单菌落和通用引物挑阳性会很有差别吗？ 3.线性化的时候，线性化后的条带是不是比未线性化的质粒跑的慢，因为同学的线性化后跑的比质粒快，这个是什么原因啊？ |
回复此楼» 猜你喜欢
实验室接单子
已经有7人回复
-
假如你的研究生提出不合理要求
已经有11人回复
-
全日制（定向）博士
已经有5人回复
-
萌生出自己或许不适合搞科研的想法，现在跑or等等看？
已经有4人回复
-
Materials Today Chemistry审稿周期
已经有4人回复
-
参与限项
已经有3人回复
-
对氯苯硼酸纯化
已经有3人回复
-
求助:我三月中下旬出站，青基依托单位怎么办？
已经有12人回复
-
所感
已经有4人回复
-
要不要辞职读博？
已经有7人回复