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amberhwk

新虫 (小有名气)

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[求助] 质粒提取酶切已有2人参与

提完质粒可以直接酶切吗，还是说一定要胶回收以后再酶切

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1楼2016-03-08 20:29:37

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ken19860823

木虫 (正式写手)

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引用回帖:

9楼: Originally posted by amberhwk at 2016-03-09 16:25:33
试剂盒提取质粒然后就直接双酶切，切出来有三条带，两条不太明显，是pcoldTF 载体
...

首先，你要酶切一个质粒，你要搞清楚质粒的全序列，这样才方便你查看你的限制性酶切位点在哪，有多少个。一般质粒用于克隆片段，克隆进去的片段一般插入的位点是多克隆位点（就是许多个相邻的限制性酶切位点）。比如你要克隆片段A到你的目的载体PcodTF载体，首先搞清楚你的片段含不含有载体多克隆位点的限制性酶切位点。选取两个不含有的限制性酶切位点作为A片段左右两端引物的一部分。这样用选择的两个酶切位点分别酶切PcoldTF和PCR扩增出来的A片段，胶回收两个片段做连接就可以转化挑克隆了。