24小时热门版块排行榜    

查看: 439  |  回复: 7
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子,参与交流,就有机会分得作者 xuehu2008 的 5 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xuehu2008

铜虫 (正式写手)

[交流] 求教关于RT-PCR

我第一次做RT-PCR,没有买到完整的试剂盒,只买到了反转录酶,是promega的,没有oligo-dT或随即引物,本想做两步法看来是不成啦,只好把一步法当成两步来做。
求教先做RT时加入的引物是一对好呢还是只加反义引物,网上两种说法都有。再者,说明书给出的RT步骤为:25度*5min——42度*60min——70度*15min,是在水浴锅中好呢还是要放到PCR仪上?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuehu2008

铜虫 (正式写手)

我的目标片段大概五百多bp,引物是Primer premier5.0设计的特异性引物
6楼2008-10-15 11:14:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

h8872410kong

金虫 (小有名气)

肯定是放PCR上
不过引物看你做的什么了,目标片段长度什么的都有点影响
2楼2008-10-15 00:13:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhongdianshi

银虫 (小有名气)

没有PCR,水浴也能对付。不知道你要得到什么?RT应该是一对引物吧。
引用回帖:
Originally posted by xuehu2008 at 2008-10-14 21:47:
我第一次做RT-PCR,没有买到完整的试剂盒,只买到了反转录酶,是promega的,没有oligo-dT或随即引物,本想做两步法看来是不成啦,只好把一步法当成两步来做。
求教先做RT时加入的引物是一对好呢还是只加反义引物 ...

3楼2008-10-15 06:27:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bbcaaa888

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by xuehu2008 at 2008-10-14 21:47:

求教先做RT时加入的引物是一对好呢还是只加反义引物 ...

先做RT只加反义引物好一点,虽然加一对也没有大碍,不过实验总是希望减少不必要的麻烦,能简单就简单;

使用PCR仪比较方便。
4楼2008-10-15 09:19:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见