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niba阿南

银虫 (小有名气)

[求助] 下丘脑组织匀浆方法 已有1人参与

下丘脑组织匀浆后,然后离心取上清,送去检测神经递质和激素,但是匀浆了好几次,都没有成功。有时候匀浆好了可在4℃离心机离心(3000r/min,20min)的时候,总没有上清出现。我匀浆的时候,首先是将称取样品,加一定量的PBS,样品:PBS=1:9(质量体积比),然后放入液氮速冻,再融化后匀浆,这样对elisa测定组织中神经递质和激素有影响吗。其实就是担心反复冻融对神经递质和激素的影响。
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双赢225311

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
努力努力
2楼2016-03-16 09:26:52
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