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18716248350

新虫 (小有名气)

[求助] 请问有没知道crispr/cas9中同源修复模板ssDNA怎么设计获得

请问有没知道crispr/cas9中同源修复模板ssDNA怎么设计获得?已知dsDNA的设计合成。
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redking2012

木虫 (正式写手)

2楼2016-03-05 18:12:03
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18716248350

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by redking2012 at 2016-03-05 18:12:03
合成啊

怎么合成啊?能不能详细说一下啊?是根据靶点设计两对引物,然后pcr融合吗?那样得到的也是双链DNA啊,怎么变成单链的?
3楼2016-03-05 20:04:04
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redking2012

木虫 (正式写手)

你可以直接让公司合成长达199bp的oligi啊

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4楼2016-03-05 20:26:22
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redking2012

木虫 (正式写手)

单链的情况下是90bp的oligo效率最高

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5楼2016-03-05 20:26:50
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18716248350

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by redking2012 at 2016-03-05 20:26:50
单链的情况下是90bp的oligo效率最高

嗯,我看到的也是说90bp最好,但是设计引物pcr后得到的是双链,怎样得到单链呢?

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6楼2016-03-05 22:56:28
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18716248350

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by redking2012 at 2016-03-05 20:26:22
你可以直接让公司合成长达199bp的oligi啊

设计合成出来的oligo只是引物得嘛,还要做pcr,做出来就是双链的的,怎么才变成单链啊?

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7楼2016-03-05 23:11:20
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redking2012

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 18716248350 at 2016-03-05 22:56:28
嗯,我看到的也是说90bp最好,但是设计引物pcr后得到的是双链,怎样得到单链呢?
...

小伙子基本功不行啊,没有看paper啊。设计的90bp oligo,公司合成的直接拿来用,谁告诉你要做pcr

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8楼2016-03-05 23:45:43
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18716248350

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by redking2012 at 2016-03-05 23:45:43
小伙子基本功不行啊,没有看paper啊。设计的90bp oligo,公司合成的直接拿来用,谁告诉你要做pcr
...

哦,这样啊,直接选取和靶基因同源的90个bp送到公司合成的就已经是单链DNA了,是这个意思吧?谢谢你了

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9楼2016-03-05 23:58:10
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redking2012

木虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 18716248350 at 2016-03-05 23:58:10
哦,这样啊,直接选取和靶基因同源的90个bp送到公司合成的就已经是单链DNA了,是这个意思吧?谢谢你了
...

你自己领悟吧

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10楼2016-03-06 00:09:54
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