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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 请问有没知道crispr/cas9中同源修复模板ssDNA怎么设计获得
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18716248350

新虫 (小有名气)

[求助] 请问有没知道crispr/cas9中同源修复模板ssDNA怎么设计获得

请问有没知道crispr/cas9中同源修复模板ssDNA怎么设计获得？已知dsDNA的设计合成。
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1楼 2016-03-05 16:17:51
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redking2012

木虫 (正式写手)
合成啊

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2楼2016-03-05 18:12:03
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18716248350

新虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by redking2012 at 2016-03-05 18:12:03
合成啊

怎么合成啊？能不能详细说一下啊？是根据靶点设计两对引物，然后pcr融合吗？那样得到的也是双链DNA啊，怎么变成单链的？
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3楼2016-03-05 20:04:04
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redking2012

木虫 (正式写手)
你可以直接让公司合成长达199bp的oligi啊

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4楼2016-03-05 20:26:22
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redking2012

木虫 (正式写手)
单链的情况下是90bp的oligo效率最高

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5楼2016-03-05 20:26:50
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18716248350

新虫 (小有名气)
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5楼: Originally posted by redking2012 at 2016-03-05 20:26:50
单链的情况下是90bp的oligo效率最高

嗯，我看到的也是说90bp最好，但是设计引物pcr后得到的是双链，怎样得到单链呢？

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6楼2016-03-05 22:56:28
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18716248350

新虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by redking2012 at 2016-03-05 20:26:22
你可以直接让公司合成长达199bp的oligi啊

设计合成出来的oligo只是引物得嘛，还要做pcr，做出来就是双链的的，怎么才变成单链啊？

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7楼2016-03-05 23:11:20
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redking2012

木虫 (正式写手)
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6楼: Originally posted by 18716248350 at 2016-03-05 22:56:28
嗯，我看到的也是说90bp最好，但是设计引物pcr后得到的是双链，怎样得到单链呢？
...

小伙子基本功不行啊，没有看paper啊。设计的90bp oligo，公司合成的直接拿来用，谁告诉你要做pcr

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8楼2016-03-05 23:45:43
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18716248350

新虫 (小有名气)
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8楼: Originally posted by redking2012 at 2016-03-05 23:45:43
小伙子基本功不行啊，没有看paper啊。设计的90bp oligo，公司合成的直接拿来用，谁告诉你要做pcr
...

哦，这样啊，直接选取和靶基因同源的90个bp送到公司合成的就已经是单链DNA了，是这个意思吧？谢谢你了

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9楼2016-03-05 23:58:10
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redking2012

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9楼: Originally posted by 18716248350 at 2016-03-05 23:58:10
哦，这样啊，直接选取和靶基因同源的90个bp送到公司合成的就已经是单链DNA了，是这个意思吧？谢谢你了
...

你自己领悟吧

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10楼2016-03-06 00:09:54
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