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【新手】DNS法测α淀粉酶 抑制实验 反应进程曲线遇到问题 已有3人参与
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本人是个酶方面的新手，想做某种物质对淀粉酶的抑制作用，这是第一次，采用的是DNS法测定产物糖的方法。 我是自己提取天然产物，然后买淀粉酶，测定天然产物对淀粉酶的抑制作用。 ① 我想先做反应进程曲线，确定合适的酶活和反应时间。 a. 预实验，1%的淀粉浓度，我选取了0.1浓度的酶，结果1-6min的OD值都是在0的上下浮动，我怀疑是淀粉酶失活了，或者浓度太低了（酶溶液一开始不懂，放在了冷藏一晚上，估计失活了） b.于是，我配置了1浓度的酶，然后配置完成立刻去测定，从1-10min的OD值都是0.5左右波动 c. 我蒙圈了，嗯，可能是酶浓度太大了，所以反应很快，1min之内就把所有淀粉都反应成了糖。于是，我配置了0.6和0.3的浓度的酶，测定1-6min的OD值变化，然后0.3的不知道为什么是乱七八糟的，0.6的结果还行，1min的时候是0.2左右，但是从2min开始之后就全部都是0.5左右。 d.让我很奔溃，合适的酶浓度和反应时间，到底怎么才能准确的测定出来，我的问题到底出在那里？？？ 如果说我的酶反应饱和了。为什么OD的最大值才0.5左右，我看有几个文献都达到了1左右。 ② 看文献，有的测定一种物质对淀粉酶得抑制，做了阴性、阳性和空白对照，可是有的实验就没有阳性对照，一定要做吗？ ③ 看文献，有一篇文献的抑制剂是有有机溶剂溶解的，就是水和乙醇一定比例，那我在想，乙醇不会对酶的活性产生影响吗？这篇文章科学么，居然做出来，结果很好，而且还发表了！ 求大神帮忙，我是试了好多还不出满意结果，感觉奔溃了！谢谢 |
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