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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 蛋白的亚细胞定位主要取决于基因N端的信号肽序列吗？
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childchou

银虫 (小有名气)

[求助] 蛋白的亚细胞定位主要取决于基因N端的信号肽序列吗？ 已有1人参与

构建了一个基因连gfp的载体准备用做亚细胞定位的，可是在这段基因中间145氨基酸突变了，全序列390个氨基酸，由valine变成了isoleucine，不知道会不会影响定位,信号肽也预测过，是第24和25氨基酸之间。
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boomshakalaka
1楼 2016-03-04 20:07:41
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childchou

银虫 (小有名气)
报告基因在C端
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boomshakalaka
2楼2016-03-04 20:08:14
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childchou

银虫 (小有名气)
第145个氨基酸
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boomshakalaka
3楼2016-03-04 23:50:07
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sun_in_night

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
childchou: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2016-03-05 19:34:58
既然都知道突变了，为什么不重新做一个。。。
影响蛋白定位的原因很多的，不一定仅仅是信号肽。比如膜蛋白，很多情况是由跨膜结构决定的；也有因为蛋白互作而定位改变的；也可能是转录后修饰等等。原因太多了。

建议重新做。
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4楼2016-03-05 06:45:02
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childchou

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by sun_in_night at 2016-03-05 06:45:02
既然都知道突变了，为什么不重新做一个。。。
影响蛋白定位的原因很多的，不一定仅仅是信号肽。比如膜蛋白，很多情况是由跨膜结构决定的；也有因为蛋白互作而定位改变的；也可能是转录后修饰等等。原因太多了。

...

非常感谢，在重新做了，不过因为结果比较急所以想试试用下这个突变的先看下，另外请教下怎么去预测或者知道基因的跨膜结构域或者其他的功能域，有在线软件吗？十分感谢！
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boomshakalaka
5楼2016-03-05 19:34:13
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sun_in_night

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by childchou at 2016-03-05 06:34:13
非常感谢，在重新做了，不过因为结果比较急所以想试试用下这个突变的先看下，另外请教下怎么去预测或者知道基因的跨膜结构域或者其他的功能域，有在线软件吗？十分感谢！...

http://www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/
这个可以预测跨膜结构
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6楼2016-03-06 09:14:18
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childchou

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by sun_in_night at 2016-03-06 09:14:18
http://www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/
这个可以预测跨膜结构...

谢谢！还有问下，分析结果显示没有跨膜结构，都是outside，意思是我的蛋白是膜外的？算是分泌蛋白吗？那我做原核表达时应该就是从菌液上清中提取蛋白了是吗？
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boomshakalaka
7楼2016-03-06 13:11:53
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sun_in_night

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by childchou at 2016-03-06 00:11:53
谢谢！还有问下，分析结果显示没有跨膜结构，都是outside，意思是我的蛋白是膜外的？算是分泌蛋白吗？那我做原核表达时应该就是从菌液上清中提取蛋白了是吗？...

保险点做表达的时候同时取上清和沉淀，跑一次胶就知道在哪了
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8楼2016-03-07 00:11:29
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