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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 割胶回收
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yeruge

新虫 (小有名气)
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割胶回收
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为什么我每次酶切之后割胶回收，DNA浓度都只有几纳克，很少很少，为什么？

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1楼 2016-03-04 13:49:20
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2012chen

新虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
一 上样量少 二 回收的kit不好 效率低

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12楼2016-03-04 13:53:24
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婷婷贝贝

新虫 (著名写手)
同意楼上。

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13楼2016-03-04 13:55:18
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懒蛋

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
过柱子就是会丢很多，但不至于几那刻，请详述操作过程

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14楼2016-03-04 13:57:29
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婷婷贝贝

新虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
再就是充分溶胶…

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15楼2016-03-04 13:57:47
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Elias_刘鑫

新虫 (正式写手)
呵呵

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16楼2016-03-04 13:58:37
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yeruge

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 懒蛋 at 2016-03-04 13:57:29
过柱子就是会丢很多，但不至于几那刻，请详述操作过程

按试剂盒说明书操作的，全式金个OMG都没提取出来，你们用的是哪个试剂盒呢

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17楼2016-03-04 14:01:11
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yeruge

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 2012chen at 2016-03-04 13:53:24
一 上样量少 二 回收的kit不好 效率低

25微升上样的

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18楼2016-03-04 14:01:49
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yeruge

新虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 婷婷贝贝 at 2016-03-04 13:57:47
再就是充分溶胶…

充分熔胶了

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19楼2016-03-04 14:02:29
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2012chen

新虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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18楼: Originally posted by yeruge at 2016-03-04 14:01:49
25微升上样的
...

和体积没关系 而是上样体积中目的片段含量是多少 Do you understand?

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20楼2016-03-04 14:03:52
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yeruge

新虫 (小有名气)
引用回帖:
20楼: Originally posted by 2012chen at 2016-03-04 14:03:52
和体积没关系 而是上样体积中目的片段含量是多少 Do you understand?
...

电泳条带很亮的

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21楼2016-03-04 14:05:49
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Yasonson

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
酶切后我都跑胶，直接安照回收的流程把酶切产物过一遍，然后就做链接。这样不会损失太多，目前连接还行。

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22楼2016-03-04 14:09:47
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yeruge

新虫 (小有名气)
引用回帖:
22楼: Originally posted by Yasonson at 2016-03-04 14:09:47
酶切后我都跑胶，直接安照回收的流程把酶切产物过一遍，然后就做链接。这样不会损失太多，目前连接还行。

你用的哪个公司的胶回收试剂盒？

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23楼2016-03-04 14:13:02
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婷婷贝贝

新虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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19楼: Originally posted by yeruge at 2016-03-04 14:02:29
充分熔胶了
...

我们也是全式金的，如果胶目的条带很亮，那就是操作问题。洗脱的时候可以少用洗脱液，离心以后再吸回离心。加到柱子里洗脱液后静止一两分钟。

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24楼2016-03-04 14:13:47
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Yasonson

金虫 (小有名气)
★
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23楼: Originally posted by yeruge at 2016-03-04 14:13:02
你用的哪个公司的胶回收试剂盒？
...

一个国产公司的百泰克吧！进口的话是OXYGEN的。

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25楼2016-03-04 14:14:34
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yeruge

新虫 (小有名气)
引用回帖:
24楼: Originally posted by 婷婷贝贝 at 2016-03-04 14:13:47
我们也是全式金的，如果胶目的条带很亮，那就是操作问题。洗脱的时候可以少用洗脱液，离心以后再吸回离心。加到柱子里洗脱液后静止一两分钟。
...

你加异丙醇没？

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26楼2016-03-04 14:21:55
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婷婷贝贝

新虫 (著名写手)
引用回帖:
26楼: Originally posted by yeruge at 2016-03-04 14:21:55
你加异丙醇没？
...

没有…

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27楼2016-03-04 14:22:39
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yeruge

新虫 (小有名气)
引用回帖:
26楼: Originally posted by yeruge at 2016-03-04 14:21:55
你加异丙醇没？
...

EB洗脱之后再吸回离心吗？

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28楼2016-03-04 14:24:50
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懒蛋

铁杆木虫 (著名写手)
★
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17楼: Originally posted by yeruge at 2016-03-04 14:01:11
按试剂盒说明书操作的，全式金个OMG都没提取出来，你们用的是哪个试剂盒呢
...

thermo scientific

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29楼2016-03-04 14:34:12
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婷婷贝贝

新虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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28楼: Originally posted by yeruge at 2016-03-04 14:24:50
EB洗脱之后再吸回离心吗？
...

对呀。全式金说明书会简单。有些说明书会说，为了增大产量，可以一次离心完以后，再加洗脱液洗脱，这是不要求浓度的时候，如果要求浓度，则吸回再离心。

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30楼2016-03-04 15:23:32
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ken19860823

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
浓度跟ng无关联啊，你的意思是ng/ul么？？？切胶回收水30ul    1kb的片段50ng/ul是有的。
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31楼2016-03-04 15:44:14
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jessy_zxy

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以试试在胶彻底溶解后，加入一滴3M乙酸钠，如果是大片段，可以加入等体积的异丙醇

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32楼2016-03-04 16:04:12
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yeruge

新虫 (小有名气)
引用回帖:
30楼: Originally posted by 婷婷贝贝 at 2016-03-04 15:23:32
对呀。全式金说明书会简单。有些说明书会说，为了增大产量，可以一次离心完以后，再加洗脱液洗脱，这是不要求浓度的时候，如果要求浓度，则吸回再离心。
...

谢谢，明天按你的方法试试

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33楼2016-03-04 20:56:26
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婷婷贝贝

新虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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33楼: Originally posted by yeruge at 2016-03-04 20:56:26
谢谢，明天按你的方法试试
...

好的，洗脱液的体积不要太大，因为用不了那么多也是浪费，稀释浓度。每一步都要做得充分。

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34楼2016-03-04 20:59:22
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yeruge

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34楼: Originally posted by 婷婷贝贝 at 2016-03-04 20:59:22
好的，洗脱液的体积不要太大，因为用不了那么多也是浪费，稀释浓度。每一步都要做得充分。
...

你一般用30微升洗脱？

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35楼2016-03-04 20:59:51
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婷婷贝贝

新虫 (著名写手)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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35楼: Originally posted by yeruge at 2016-03-04 20:59:51
你一般用30微升洗脱？
...

我一般都用20ul洗脱，不要看说明书的洗脱体积。如果量少，甚至有时候用不到20洗脱。

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36楼2016-03-04 21:00:48
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yeruge

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36楼: Originally posted by 婷婷贝贝 at 2016-03-04 21:00:48
我一般都用20ul洗脱，不要看说明书的洗脱体积。如果量少，甚至有时候用不到20洗脱。
...

噢噢，加WB之后离心，一般开盖多久让乙醇挥发？还有，你每次纯化之后260/230的比值是多少？

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37楼2016-03-04 21:02:21
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婷婷贝贝

新虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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37楼: Originally posted by yeruge at 2016-03-04 21:02:21
噢噢，加WB之后离心，一般开盖多久让乙醇挥发？还有，你每次纯化之后260/230的比值是多少？
...

一到两分钟吧。。能在2左右。。试剂盒提取的，经常大于2

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38楼2016-03-04 21:41:45
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牛红

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
造成这个问题的原因可能有好几个，需要一一排除，首先是确保你实验操作没出差错，其次试剂盒用的是不是真的，又一次我抽了半个月的质粒最后发现那个批次的试剂盒早过期了。
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39楼2016-03-04 22:21:56
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yeruge

新虫 (小有名气)
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38楼: Originally posted by 婷婷贝贝 at 2016-03-04 21:41:45
一到两分钟吧。。能在2左右。。试剂盒提取的，经常大于2
...

我的零点几额

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40楼2016-03-05 08:37:51
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婷婷贝贝

新虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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40楼: Originally posted by yeruge at 2016-03-05 08:37:51
我的零点几额
...

额…那应该就是晾得不行了…你可以选择多晾一会。。

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41楼2016-03-05 10:15:46
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yeruge

新虫 (小有名气)
引用回帖:
41楼: Originally posted by 婷婷贝贝 at 2016-03-05 10:15:46
额…那应该就是晾得不行了…你可以选择多晾一会。。
...

胶没冷？

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42楼2016-03-05 11:12:48
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婷婷贝贝

新虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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42楼: Originally posted by yeruge at 2016-03-05 11:12:48
胶没冷？
...

……溶胶以后，让胶冷却，过柱子，洗涤，洗脱以前开盖晾干，大约一到两分钟，洗脱液加热，洗脱，重复洗脱。

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43楼2016-03-05 11:20:34
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aoluoquan

银虫 (正式写手)
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24楼: Originally posted by 婷婷贝贝 at 2016-03-04 14:13:47
我们也是全式金的，如果胶目的条带很亮，那就是操作问题。洗脱的时候可以少用洗脱液，离心以后再吸回离心。加到柱子里洗脱液后静止一两分钟。
...

全式金的胶回收kit也不好，不要误导小朋友，我用过很多公司的胶回收KIT，大部分回收效率低，就只有一家效率高的

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44楼2016-03-05 13:29:21
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婷婷贝贝

新虫 (著名写手)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
44楼: Originally posted by aoluoquan at 2016-03-05 13:29:21
全式金的胶回收kit也不好，不要误导小朋友，我用过很多公司的胶回收KIT，大部分回收效率低，就只有一家效率高的
...

只能说还行。。我们以前用takara，但是贵啊。你要考虑到经费问题，东西当然是贵的好，他现在就用这种，你能让他怎么办？只能找原因

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45楼2016-03-05 13:42:18
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aoluoquan

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
45楼: Originally posted by 婷婷贝贝 at 2016-03-05 13:42:18
只能说还行。。我们以前用takara，但是贵啊。你要考虑到经费问题，东西当然是贵的好，他现在就用这种，你能让他怎么办？只能找原因
...

qiagen takara transgen 天根（还有一个忘了叫什么名字，商标是个大象）这些都不好，thermo和lifefeng有试剂盒，但还没试过，

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46楼2016-03-05 13:54:03
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yeruge

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引用回帖:
45楼: Originally posted by 婷婷贝贝 at 2016-03-05 13:42:18
只能说还行。。我们以前用takara，但是贵啊。你要考虑到经费问题，东西当然是贵的好，他现在就用这种，你能让他怎么办？只能找原因
...

takara的胶回收好用吗？回收效率怎么样？

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47楼2016-03-06 12:06:11
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yeruge

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引用回帖:
44楼: Originally posted by aoluoquan at 2016-03-05 13:29:21
全式金的胶回收kit也不好，不要误导小朋友，我用过很多公司的胶回收KIT，大部分回收效率低，就只有一家效率高的
...

哪家效率高？

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48楼2016-03-06 12:19:09
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yeruge

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引用回帖:
45楼: Originally posted by 婷婷贝贝 at 2016-03-05 13:42:18
只能说还行。。我们以前用takara，但是贵啊。你要考虑到经费问题，东西当然是贵的好，他现在就用这种，你能让他怎么办？只能找原因
...

经费不是问题

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49楼2016-03-06 12:20:02
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婷婷贝贝

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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47楼: Originally posted by yeruge at 2016-03-06 12:06:11
takara的胶回收好用吗？回收效率怎么样？
...

当然好啊。。效率这个没法说，但是挺贵的。。。其实我觉得做实验还是手法问题。我换了试剂盒没有多大影响

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50楼2016-03-06 13:03:41
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婷婷贝贝

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★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
经费没事，那建议进口的。takara和qiagen这一类

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51楼2016-03-06 13:08:27
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yeruge

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引用回帖:
50楼: Originally posted by 婷婷贝贝 at 2016-03-06 13:03:41
当然好啊。。效率这个没法说，但是挺贵的。。。其实我觉得做实验还是手法问题。我换了试剂盒没有多大影响
...

关键是实验室几个人都提不出来

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52楼2016-03-06 13:47:01
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yeruge

新虫 (小有名气)
引用回帖:
50楼: Originally posted by 婷婷贝贝 at 2016-03-06 13:03:41
当然好啊。。效率这个没法说，但是挺贵的。。。其实我觉得做实验还是手法问题。我换了试剂盒没有多大影响
...

看了一下价格，才350啊，50次

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53楼2016-03-06 13:51:58
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江南的竹2楼
2016-03-04 13:49   回复  
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haizigzj3楼
2016-03-04 13:49   回复  
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温柔的黄瓜4楼
2016-03-04 13:49   回复  
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daniel.gauss5楼
2016-03-04 13:49   回复  
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throne20086楼
2016-03-04 13:49   回复  
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lizhonglun7楼
2016-03-04 13:49   回复  
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181466251918楼
2016-03-04 13:49   回复  
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baiyun20139楼
2016-03-04 13:49   回复  
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刘阿冰10楼
2016-03-04 13:49   回复  
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iCell赛百慷11楼
2016-03-04 13:49   回复  
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