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黏小神

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr产物电泳分析 已有3人参与

小白一只,最近开始做pcr(筛引物),能p出来,但是效果感觉不好!如图所示,左边第一个为M,四个引物,每个5个DNA样,大神们能给我指出其中可能存在的问题吗?我自己实在是无法确定哪里的问题!(感觉哪里都有问题)!或者给我说说pcr或凝胶电泳应该注意的细节之类的,不胜感激!

pcr产物电泳分析
2016-03-03.jpg
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prthefu

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

条带太弥散了。而且,你没表达清楚,你是每五个孔分别五个模板跑,还是你一个模板点五个孔跑的啊。
如果你每五个孔都分别代表五个模板的话,那就说明左边两个根本没有p出来,而且,两外三个也p的不是特别好,弥散、拖尾,而且,还有好多杂带。
最后,看你左边marker跑的也不是太理想,稍微有些歪歪扭扭,所以,你做胶也有一定的问题。

by the  way,问一下,你这种图片是怎么拍的啊,我通常就是简单的用手机照,每次都不是太清楚·····
nothing is impossible in this world,if you have the will to win,you can achieve anything
13楼2016-03-08 21:10:01
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lxkui_sina

金虫 (小有名气)

我判断最大的问题是引物的问题! 你的模板是基因组DNA吗?

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2楼2016-03-03 23:32:39
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lxkui_sina

金虫 (小有名气)

用在线Primer3来设计引物。退火温度尽量高,根据引物Tm值而定。

发自小木虫IOS客户端
3楼2016-03-03 23:34:54
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lxkui_sina

金虫 (小有名气)

你这几个引物就别用了,重新设计吧!

发自小木虫IOS客户端
4楼2016-03-03 23:35:47
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